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毓秀生物科技(上海)有限公司

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[供應(yīng)]載體構(gòu)建,亞克隆,載體克隆

貨物所在地:上海上海市

更新時間:2025-06-04 21:00:06

有效期:2025年6月4日 -- 2025年12月4日

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載體構(gòu)建(vectorconstruction),為把DNA分子運送到受體細(xì)胞中去,必須尋找一種能進(jìn)入細(xì)胞、在裝載了外來的DNA片段后仍能照樣復(fù)制的運載體。理想的運載體是質(zhì)粒(plasmid),在基因工程中,常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。載體構(gòu)建即是構(gòu)建含外源DNA的質(zhì)粒。

  載體構(gòu)建(vectorconstruction)是分子生物學(xué)研究常用的手段之一。依賴于限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和其它修飾酶的作用,分別對目的基因和載體DNA進(jìn)行適當(dāng)切割和修飾后,將二者連接在一起,再導(dǎo)入宿主細(xì)胞,實現(xiàn)目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的正確表達(dá)。載體構(gòu)建主要包括已有載體多克隆位點MCS的改造和已有載體啟動子、增強子、篩選標(biāo)記等功能元件的改造。載體構(gòu)建完成后可利用PCR原理進(jìn)行測序驗證。

  載體構(gòu)建實驗步驟:

  1)引物設(shè)計,PCR擴增目的片段

  2)酶切目的片段與載體

  3)載體構(gòu)建連接或重組

  4)轉(zhuǎn)化

  5)涂板

  6)載體構(gòu)建挑取克隆酶切或PCR鑒定

  7)測序驗證

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