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Blue-Gal檢測β-半乳糖苷酶技術原理和主要應用

時間:2023/11/13閱讀:375
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β-半乳糖苷酶 β-galactosidase存在于多種細菌、真核生物細胞和一些病原體中,參與乳糖代謝與細胞衰老過程。β-半乳糖苷酶在哺乳動物體內其主要存在于腸道菌群中,但在老化細胞也有一定活性。β-半乳糖苷酶廣泛存在于生物體,在演化與生存過程中發揮重要作用。


Blue-Gal是一種β-半乳糖苷酶重要的顯色底物,可產生比 X-gal更深的藍色。β-半乳糖苷酶水解 blue-gal 產生不溶于乙醇和二甲苯的藍色沉淀物,適于免疫印跡和免疫細胞化學分析。Blue-Gal是一種廣泛應用于組織化學、細胞生物學、分子生物學與酶學研究的重要化學試劑。它通過檢測β-半乳糖苷酶的活性與表達,為腫瘤研究、干細胞分化、基因表達調控與細胞活性評價提供有效工具。


規格參數:

HGS-01045 5-溴-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 Blue-Gal Bluo-Gal 97753-82-7


Blue-Gal檢測β-半乳糖苷酶技術原理:

Blue-Gal在β-半乳糖苷酶的作用下可被水解生成半乳糖和5-溴-4-氯-3-吡啶-2-醛,后者與氫氧化鐵反應生成藍色產物。


Blue-Gal檢測β-半乳糖苷酶活性步驟:

1. 向樣品中加入Blue-Gal底物,如果樣品中存在β-半乳糖苷酶,Blue-Gal將被水解;否則Blue-Gal保持不變。

2. 反應一定時間后,加入氫氧化鐵(Fehling試劑),如果Blue-Gal被水解,會與氫氧化鐵反應生成藍色產物;否則無色。

3. 通過顯微鏡下的藍色沉淀或藍色溶液判斷β-半乳糖苷酶的存在與否。或者測量藍色產物的吸光度,根據標準曲線計算酶活性或濃度。

4. 根據反應條件如時間、溫度、pH等控制變量,可以檢測β-半乳糖苷酶活性的變化或酶反應動力學,以評價不同因素對其活性的影響。

5. 也可以在固定反應條件下,比較不同樣品中藍色產物的生成,以判斷β-半乳糖苷酶活性或表達的高低。這用于轉基因檢測、細胞活性比較等。


Blue-Gal檢測β-半乳糖苷酶主要應用:

1. 組織化學染色

Blue-Gal用于檢測組織內β-半乳糖苷酶活性或β-gal過表達,實現組織化學染色。常用于檢測腫瘤組織在癌變過程中lacZ基因表達變化。

2. 干細胞和分子生物學研究

Blue-Gal用于檢測干細胞向特定類型細胞的分化過程中lacZ基因的表達,以監測干細胞向目標細胞的定向分化。也用于研究lacZ基因在胚胎發育與分子信號轉導過程中的表達調控。

3. 轉基因檢測

Blue-Gal用于檢測不同組織及細胞中轉入的lacZ報告基因表達,實現對組織特異性啟動子活性與組織向性的檢測評價。

4. 細胞活性與毒性檢測

Blue-Gal用于檢測不同條件下細胞內β-半乳糖苷酶活性的變化,間接反映細胞代謝活性的增強或抑制,用于細胞活性與毒性檢測。如某些試劑對β-半乳糖苷酶活性的影響可判斷其對細胞活性的作用。

5. 酶學研究

Blue-Gal作為β-半乳糖苷酶的重要底物,用于研究β-半乳糖苷酶的酶學性質、基因調控作用機制以及激活與抑制因素,為酶學基礎研究提供工具。

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