化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ASA-GSH 循環(huán)類檢測|茁彩生物
閱讀：152 發(fā)布時間：2025-7-24ASA-GSH 循環(huán)，即抗壞血酸 - 谷胱甘肽循環(huán)，是生物體內(nèi)重要的抗氧化系統(tǒng)之一，在維持細胞 redox 平衡、抵御活性氧（ROS）損傷方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。對該循環(huán)相關(guān)物質(zhì)及酶的檢測，對于研究機體抗氧化能力、氧化應(yīng)激狀態(tài)以及相關(guān)疾病的發(fā)生機制具有重要意義。
一、檢測指標
ASA-GSH 循環(huán)涉及多種物質(zhì)和酶，這些都是重要的檢測指標，主要包括：
抗壞血酸（ASA）：作為循環(huán)中的關(guān)鍵抗氧化物質(zhì)，ASA 能直接清除 ROS，同時在抗壞血酸過氧化物酶（APX）的作用下參與對 H?O?的清除。其含量的高低直接反映了機體在該循環(huán)中的抗氧化潛力。檢測 ASA 的含量可以了解機體抗氧化系統(tǒng)的初始防御能力。
谷胱甘肽（GSH）：GSH 是一種含巰基的小分子肽，在循環(huán)中起著傳遞還原當(dāng)量的作用。它可被氧化為氧化型谷胱甘肽（GSSG），同時將電子傳遞給其他物質(zhì)，參與抗氧化反應(yīng)。GSH/GSSG 的比值是衡量細胞 redox 狀態(tài)的重要指標，比值降低通常表明細胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。
抗壞血酸過氧化物酶（APX）：APX 是 ASA-GSH 循環(huán)中的關(guān)鍵酶，它能利用 ASA 作為電子供體，催化 H?O?分解為水，從而減少 H?O?對細胞的損傷。APX 的活性高低直接影響著循環(huán)清除 H?O?的效率，其活性變化可反映機體應(yīng)對氧化應(yīng)激的能力。
單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）：該酶能以 NADPH 為電子供體，將單脫氫抗壞血酸（MDHA）還原為 ASA，使 ASA 得以再生，維持 ASA 在循環(huán)中的含量穩(wěn)定。檢測 MDHAR 的活性有助于了解 ASA 的再生能力，進而評估循環(huán)的持續(xù)抗氧化效能。
脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）：DHAR 可催化脫氫抗壞血酸（DHA）還原為 ASA，此過程需要 GSH 提供還原當(dāng)量，同時 GSH 被氧化為 GSSG。該酶在 ASA 的再生和 GSH 的利用方面發(fā)揮著重要作用，其活性變化會影響 ASA 和 GSH 的動態(tài)平衡。
谷胱甘肽還原酶（GR）：GR 能利用 NADPH 將 GSSG 還原為 GSH，使 GSH 得以再生，保證 GSH 在循環(huán)中的持續(xù)供應(yīng)。GR 的活性對于維持 GSH 的含量和 GSH/GSSG 比值至關(guān)重要，是衡量循環(huán)中 GSH 再生能力的關(guān)鍵指標。
二、常用檢測方法
ASA-GSH 循環(huán)類檢測常用的方法基于各自指標的化學(xué)特性和反應(yīng)原理，主要有以下幾種：
分光光度法：這是常用的檢測方法之一。對于 ASA 和 GSH，可利用它們與特定試劑發(fā)生顯色反應(yīng)的特性，通過分光光度計測定反應(yīng)液在特定波長下的吸光度，再根據(jù)標準曲線計算其含量。例如，GSH 可與 DTNB（5,5'- 二硫代雙 - 2 - 硝基苯甲酸）反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，在 412nm 處有特征吸收峰。對于 APX、MDHAR 等酶類，可通過監(jiān)測反應(yīng)體系中底物或產(chǎn)物在特定波長下吸光度的變化速率來計算酶活性。如 APX 催化 H?O?分解時，ASA 被氧化，其在 290nm 處的吸光度會下降，根據(jù)吸光度下降速率可計算 APX 活性。
高效液相色譜法（HPLC）：HPLC 具有高分離度和高靈敏度的特點，可同時對 ASA、GSH、GSSG 等多種物質(zhì)進行定量檢測。通過選擇合適的色譜柱和流動相，能將不同物質(zhì)分離，再根據(jù)其保留時間和峰面積進行定性和定量分析。該方法準確性高，適用于對檢測精度要求較高的實驗。
酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）：對于一些難以通過分光光度法或 HPLC 檢測的酶或物質(zhì)，可采用 ELISA 法。該方法利用抗原 - 抗體特異性結(jié)合的原理，將待測物質(zhì)與酶標記的抗體結(jié)合，通過酶催化底物顯色，根據(jù)顯色強度確定待測物質(zhì)的含量或活性。ELISA 法特異性強、靈敏度高，適用于微量物質(zhì)的檢測。
三、檢測意義
ASA-GSH 循環(huán)類檢測在多個領(lǐng)域具有重要意義：
抗氧化研究：通過檢測循環(huán)中各指標的變化，可深入了解機體的抗氧化機制，評估不同生理或病理狀態(tài)下機體的抗氧化能力。例如，在植物逆境脅迫研究中，檢測 ASA-GSH 循環(huán)相關(guān)指標能明確植物在干旱、高溫、鹽脅迫等條件下的抗氧化響應(yīng)機制。
疾病診斷與研究：許多疾病的發(fā)生發(fā)展與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，如心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、癌癥等。ASA-GSH 循環(huán)指標的異常變化可能是這些疾病的早期表現(xiàn)或發(fā)病機制之一。通過檢測這些指標，可為疾病的早期診斷、病情監(jiān)測和治療效果評估提供參考依據(jù)。例如，在阿爾茨海默病患者中，常可檢測到 ASA-GSH 循環(huán)指標的異常，提示氧化應(yīng)激在該病的發(fā)生中可能起重要作用。
藥物研發(fā)：在藥物研發(fā)過程中，可通過檢測 ASA-GSH 循環(huán)相關(guān)指標，評估藥物的抗氧化活性或?qū)C體氧化應(yīng)激狀態(tài)的調(diào)節(jié)作用。這有助于篩選出具有潛在抗氧化功效的藥物，為相關(guān)疾病的治療提供新的思路和方法。