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細胞自噬科研實驗技術服務介紹
閱讀：216 發布時間：2024-9-18細胞自噬
應用簡介
自噬與多種生理反應相關，比如腫瘤，炎癥，免疫應答，氧化應激等。通常情況下，對于自噬的研究，除了發生的機制本身外，更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結合起來。比如研究自噬在腫瘤的發生發展，炎癥反應，氧化應激等不同生物學功能的作用。
技術原理
自噬是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器，最終將吞食物在溶酶體內降解的過程。自噬體（自噬體）為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構，內含細胞質，長壽蛋白質和異常蛋白聚集物，損傷或多余細胞器如線粒體，粗面內質網和微體，病毒和細菌等。
自噬過程：
1、細胞接受自噬誘導信號后，在胞漿的某處形成一個小的類似"脂質體"樣的膜結構，然后不斷擴張，被稱為Phagophore。
2、Phagophore不斷延伸，將胞漿中的任何成分，全部攬入，然后"收口"，成為密閉的球狀的autophagosome，即"自噬體"。
3、自噬體形成后，可與細胞內吞的吞噬泡、吞飲泡和內體融合（這種情況不是必然要發生的）。
4、自噬體與溶酶體融合形成autolysosome，期間自噬體的內膜被溶酶體酶降解，2者的內容物合為一體，自噬體中的"貨物"也被降解，產物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中，供細胞重新利用，而殘渣或被排出細胞外或滯留在胞漿中。
實驗方法
一、自噬誘導劑
1、BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內質網應激
2、Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）
3、Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓
4、N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：ClassIPI3KPathway抑制劑
5、Rapamycin：mTOR抑制劑
6、XestosponginB/C：IP3R阻滯劑
二、自噬抑制劑
1、3-Methyladenine（3-MA）：（ClassIIIPI3K）hVps34抑制劑
2、BafilomycinA1：質子泵抑制劑
3、Hydroxychloroquine（羥氯喹）：Lysosomallumenalkalizer（溶酶體腔堿化劑）
除了選用上述工具藥外，一般還需結合遺傳學技術對自噬相關基因進行干預：包括反義RNA干擾技術（Knockdown）、突變株篩選、外源基因導入等。