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核酸提取科研實驗技術服務介紹
閱讀：178 發布時間：2024-9-24核酸提取
應用簡介
核酸提取是分子生物學的基本組成部分，高質量的核酸在分子生物學上的應用至關重要。核酸提取為大量廣泛研究和應用提供了答案（例如：克隆、qRT-PCR和全基因組、轉錄組范疇中的二代測序技術），獲得的核酸可以在分析基礎研究和疾病研究中的基因表達、跟蹤對藥物治療的反應、識別新物種并深入了解進化過程、診斷疾病等方面以不同方式進行應用。
技術原理
核酸具有貯存和傳遞遺傳信息等重要生物功能，是分子生物學研究的主要對象。采用常規吸附柱法抽提樣本中的DNA、RNA，為下游實驗提供高純度和高濃度的模板。
DNA提取方法：對基因組DNA的提取方法主要有CTAB，SDS和其他如玻璃珠法，酶法等。質粒DNA的提取主要有堿裂解法和煮沸法；線粒體，葉綠體DNA的提取主要有差速離心結合SDS法。
RNA提取方法：異硫氰酸胍/苯酚法。基本實驗原理：細胞在變性異硫氰酸胍作用下裂解，核酸釋放。DNA和RNA在特定pH下溶解度不同而分別于體系的中間相與水相，得以分離。進行有機溶劑抽提，沉淀，得到純凈RNA。
實驗方法
1、細胞裂解法
物理方式：煮沸法、玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法、勻漿法
化學方式：表面活性劑(SDS法)、堿裂解法
生物方式：酶法(溶菌酶、蛋白酶K等)
2、常見樣本提取方法
總結濃鹽法：利用RNA和DNA在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離。
有機溶劑提取法：有機溶劑作為蛋白變性劑，同時抑制核酸酶的降解作用。
高度梯度離心法：利用不同內容物密度不同的原理分離各種內容物。
吸附材料結合法：①硅質材料高鹽低PH值結合核酸，低鹽高PH值洗脫②陰離子交換樹脂低鹽高PH值結合核酸，高鹽低PH值洗脫③磁珠磁珠微粒包裹上不同基因可吸附不同的目的物，從而達到分離目的。
胍鹽提取結合二氧化硅吸附法：二氧化硅具有特異吸附核酸的特性，異硫氰酸胍可使細胞裂解，因此在高濃度異硫氰酸胍存在下，從細胞包括細菌或者病毒顆粒中釋放出來的核酸成分可以結合在二氧化硅上，利用此特性可提取血液和尿液中的DNA和RNA。
TRlzol試劑提取RNA：用TRlzol試劑裂解細胞，再加入氯仿，離心后可見三層，上層為透明的水相含有RNA,中間含有DNA，下層為紅色的有機相，含蛋白質。
離心柱提取：離心柱技術是用于微量核酸分離純化的較為簡單的方法，屬于硅吸附方法的一種，在原理上可分為三個部分：①利用裂解液促使細胞破碎，使細胞中的核酸釋放出來。②把釋放出來的核酸特異吸附在特定的硅載體上，這種載體只對核酸有較強的親和力和吸附力，對其他生化成分如蛋白質、多糖、脂類則基本不吸附，因而離心時被甩出柱子。③把吸附在特異載體上的核酸用洗脫液洗脫下來，分離得到純化的核酸。
磁珠法：依據與硅膠膜離心柱相同的原理，運用納米技術對超順磁性納米顆粒的表面進行改良和表面修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。利用氧化硅納米微球的超順磁性，在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下，能從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中的DNA和RNA分離出來，可應用于臨床疾病診斷、輸血安全、法醫學鑒定、環境微生物檢測、食品安全檢測、分子生物學研究等多種領域。
常見問題
洗脫產物DNA量很少或沒有？
樣品中細胞濃度低；
樣品裂解不充分；
DNA吸附不充分。
DNA影響后續酶反應實驗？
乙醇有殘留；空離完成后再將吸附柱置室溫或溫箱2min左右，che底去除乙醇。
核酸降解？
樣本不新鮮（尤其對于RNA而言）；
前處理不當（樣本量過大）。