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應用簡介
      腫瘤細胞/癌細胞的耐藥性是腫瘤/癌癥難以gen治的重要原因。體外構建的耐藥細胞株，能模擬腫瘤細胞/癌細胞對特異藥物耐藥性的形成過程，有助于人們理解腫瘤細胞/癌細胞獲得耐藥性的機制，篩選獲得抗耐藥性的特異藥物，并對相關疾病進行有針對性地臨床治療。
原理介紹
      一種藥物作用于某類細胞后，會殺死其中沒有抗性的細胞，而這類細胞中具有抗性的細胞不會被殺死，即進行了選擇。具有抗性的細胞大量繁殖產生很多抗性后代，再用這種藥物時表現出的藥效大大下降的現象就是細胞的耐藥性。采用體外低濃度梯度遞增聯合大劑量間斷沖擊方法誘導腫瘤細胞對特定藥物產生耐藥性，從而構建出對特定藥物產生耐藥性的腫瘤細胞株。
實驗方法
      一、檢測親本細胞株的IC50IC50(halfmaximalinhibitoryconcentration),即半抑制濃度,指某一種物質對某些生物程序抑制達到50%抑制效果時的濃度。對細胞增殖方面,可以理解為對細胞增殖的抑制效果達到細胞正常增殖水平50%時的藥物濃度。通常用IC50來衡量藥物對細胞的毒性或者細胞 對藥物的耐受能力,在藥物實驗中,常用IC50來評估實驗中使用的藥物濃度。IC50的計算方法很多,常用的有Excel、graphpadprism、SPSS等。
      二、藥物濃度遞增法/大劑量藥物沖擊法
      1、大劑量間隙作用：對數生長期的細胞接種于培養瓶中，生長至70%～80%匯合時，將處于對數生長期的腫瘤細胞置于含有濃度的藥物濃度的培養液中培養，棄去培養液，PBS清洗2遍，更換不含藥物培養基，常規培養，待細胞恢復生長，培養一段時間后更換不含藥物的RPMI-1640（DMEM）胎牛血清培養液繼續培養。待細胞穩定生長、進入對數生長期后，傳代兩次，再將篩選出的細胞在濃度的藥物濃度培養液中繼續培養依這樣不斷改變作用時間，共經過1h、2h、3h、6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h共10個作用時間段，約8個月的培養，終使得細胞能夠在一定濃度的藥物的培養液中持續穩定生長并傳代，然后脫藥培養1個月在檢測細胞的生物特性及耐藥指標。

2、濃度梯度遞增間隙作用：采用藥物濃度遞增培養法沖擊誘導，對數生長期的細胞接種于培養瓶中，細胞處于60～70%濃度對數期生長時，加入起始濃度為低濃度的藥物作用24h，棄去培養液，PBS清洗2遍，更換不含藥物培養基，細胞恢復生長后，消化傳代復以低濃度作用細胞24h，待細胞增殖至正常形態后，重復上述藥物沖擊，每種濃度沖擊8次。待細胞在此濃度穩定生長后，提高藥物濃度繼續培養，藥物依次遞增濃度加藥。藥物誘導歷時大約9個月，直到細胞能夠在濃度的藥物中穩定生長。
      三、檢測耐藥細胞株的IC50。
      根據IC50值計算出耐藥指數（resistanceindex,RI），RI=耐藥細胞系的IC50/親代細胞系的IC50，RI>5則認為耐藥細胞系的耐藥性符合耐藥株的要求。