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梯度PCR儀常見問題的主要解決方案分享

閱讀:1868      發布時間:2022-9-26
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   梯度PCR儀是一臺小巧、可靠且經濟的多孔PCR儀,非常適合小型實驗室。有高分辨率超大彩色液晶顯示屏,實驗過程中實時顯示溫控及運行狀態。用戶可設置休眠模式使其更節電。
  梯度PCR儀常見問題的主要解決方案:
  1.梯度PCR儀在產物序列中引入了錯誤
  這是由于聚合酶忠實性低或者循環數太多,這時需要使用帶有校正活性的熱穩定聚合酶,同時降低循環數。此外,四種dNTP的濃度不同也會出現該問題,此時應制備新的濃度相同的dNTP混合物。
  2.PCR跑膠
  該現象表現為目的條帶很亮,但是邊沿不清楚,前后有拖尾現象。出現這樣的問題,則需要進行細致的分析,因為引起該問題的可能很多。可先檢查是否模板質量問題,如有降解等,模板應避免反復凍融。也有可能是抽提RNA時有污染,則需要重新抽提RNA。此外,也可能是非特異性擴增引發該問題,可提高退火溫度,少循環次數。電泳緩沖液時間太長,ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時電壓太高、電泳液過久沒換,電泳膠臟了等都可能引發該問題。如果不是由上述原因引起,則進一步檢查加樣量是否過大,制膠過程中膠孔是否制好,EB是否沖洗干凈、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴增的條件不合適。針對具體原因再采取相應的措施。
  3.對梯度PCR儀產物需要用凝膠純化的時間掌控
  當凝膠分析擴增產物只有一條帶時,則無需使用凝膠純化;
  當可見其他雜帶時,則可能是積累了大量引物的二聚體,在克隆前需要做凝膠純化。

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