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技術文章

石蠟冰凍包埋及切片技術服務

閱讀:2707          發布時間:2019-12-18

技術服務介紹

石蠟切片(paraffin section)組織學常規制片技術中廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態結構,也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。教學中,光鏡下觀察切片標本多數是石蠟切片法制備的。活的細胞或組織多為無色透明,各種組織間和細胞內各種結構之間均缺乏反差,在一般光鏡下不易清楚區別出;組織離開機體后很快就會死亡和產生組織,失去原有正常結構,因此,組織要經固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡,而能清晰辨認其形態結構。

新鮮組織經過固定取材脫水透明浸蠟后用特定的包埋模具將前期處理的組織塊與融化的石蠟一起包埋成組織蠟塊的過程稱為組織取材包埋。

技術服務流程:

組織石蠟包埋切片實驗步驟

1、取材:新鮮組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出在通風櫥內用手術刀將目的部位組織修平整,將修切好的組織和對應的標簽放于脫水盒內。

2、脫水:將脫水盒放進吊籃里于脫水機內依次梯度酒精進行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無水乙醇I 30min-無水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蠟I 1h-蠟II 1h-蠟III 1h。

3、包埋:將浸好蠟的組織于包埋機內進行包埋。先將融化的蠟放入包埋框,待蠟凝固之前將組織從脫水盒內取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對應的標簽。于-20°凍臺冷卻,蠟凝固后將蠟塊從包埋框中取出并修整蠟塊。

4、切片:將修整好的蠟塊置于石蠟切片機上切片,片厚4μm。 切片漂浮于攤片機40℃ 溫水上將組織展平,用載玻片將組織撈起,并放進60℃ 烘箱內烤片。待水烤干蠟烤化后取出常溫保存備用。

冰凍切片制片實驗步驟

1、 組織固定:新鮮組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出在通風櫥內用手術刀將目的部位組織修平整。

2、 脫水:將修切好的組織放于15%的蔗糖溶液內4°冰箱脫水沉底后轉入30%的蔗糖溶液內4°冰箱脫水沉底。

3、 OCT包埋:將脫好水的組織取出用濾紙將表面水稍吸干后切面朝上放于包埋臺上,組織周圍滴上OCT包埋劑,將包埋臺放在冰凍切片機的速凍臺上速凍包埋,OCT變白變硬后即可進行切片。

4、 切片:將包埋臺固定于切片機上,先粗切將組織面修切平整后即可開始切片,切片厚°8-10μm。將干凈的載玻片平放于切出的組織片上方即可將組織貼于載玻片上。-20°保存備用。

客戶須知

 1、新鮮組織盡快放入固定液固定

 2、固定液的體積至少是固定組織體積的10倍

 3、組織取材厚度1-3mm

實驗周期

本公司常規實驗周期為15個工作日。(不含送貨時間)

收費標準

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