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SILAC+IP-MS-蛋白質互作定量分析整體服務
閱讀：1862 發布時間：2019-12-26SILAC+IP-MS-蛋白質互作定量分析整體服務簡介：
利用IP純化蛋白質復合物時，除了能捕獲到Target蛋白及其互作蛋白之外，細胞中一些與抗體/抗體偶聯材料（agarose、magnetic beads等）高親和的蛋白質也會被一起捕獲下來（非特異性粘附蛋白），并且這些蛋白都是高豐度的。故而，在后續的LC-MS鑒定時，這些非特性的蛋白質會被高頻率的檢測到。這就帶來了一個很困擾的問題：由于沒有定量信息，在眾多鑒定到的蛋白質中，如何才能排除非特性的粘附蛋白，找出真正的、與target特異性互作的蛋白。
將SILAC和IP技術相結合，借助SILAC引入質量差異，IP完成后，蛋白質復合物通過LC-MS分析，可同時完成定性（即鑒定，給出樣品中有那些蛋白質）和定量（給出每個蛋白質被IP富集的相對程度）。根據定量結果結合軟件統計分析，即可直接區分出那些是target特異性的相互作用蛋白（SILAC ratio＞1.0），那些是非特異性的粘附蛋白（SILAC ratio=1.0）。從而快速篩選和鎖定特異性的相互作用分子，后續生物學驗證成功率明顯提高。
技術和實驗方案”高、大、上“，能顯著提高文章的檔次。
整體服務方案：
客戶只需提供基因名稱和細胞株即可，我方負責完成后續所有實驗，包括：
基因克隆與慢病毒制備。
穩定細胞株構建與鑒定。
細胞SILAC標記及標記效率檢測。
細胞擴增培養。
IP純化蛋白質復合物并SDS-PAGE分離。
切割條帶，LC-MS測試分析。
MS數據定性和定量分析，依據SILAC的定量值（SILAC ratio）篩選潛在的互作蛋白。
挑選潛在的候選驗證蛋白（6個）進行后續驗證。承諾6個驗證蛋白，至少給出1個陽性的互作。
參考文獻：
Nat Immunol 2014, 15(2):112-117.
Proc Natl Acad Sci U S A 2014, 111(51):18219-18224.
Science 2013, 340(6131):475-478.
Nat Cell Biol 2013, 15(6):625-636.