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Zeta Life 轉染試劑轉染raw 264.7細胞如何提高轉染效率
閱讀：1508 發布時間：2020-3-26用試劑轉染raw 264.7細胞怎樣提高轉染效率一直是困擾實驗者的一道難題，特別對于10000左右質粒DNA的轉染更是困難；我們實驗室總結了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑貨號AD600025轉染raw 264.7細胞一套優化方案希望對大家轉染raw 264.7細胞提高轉染效率有一定的幫助。
下圖是8000bp左右的pEGFP-C1在6孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA轉染試劑轉染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。
提高轉染raw 264.7細胞條件如下
一、質粒DNA準備
1、質粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內毒素
二、操作流程
1、先將細胞接種到細胞培養板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉染。
2、復合物制備：將質粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600025轉染試劑按照1:1（12ug:12ul）關系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。
3、將復合物加入*培養基的細胞培養板，并輕輕混勻，放入培養箱中繼續培養（不建議把復合物加入到無血清的培養基里面，我后期會進一步摸索此條件）。
4、轉染24小時后對細胞進行正常換液。
5、質粒DNA轉染48小時后熒光檢測轉染效率
三、注意事項：
1本轉染方法不適用在下面轉染試劑的轉染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等；
2細胞培養基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;
四、美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉染試劑信息：
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 數量 | 報價 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600025 | 0.25ML | 1 | 1590 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600050 | 0.5 | 1 | 2390 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600075 | 0.75 | 1 | 2890 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600150 | 1.5ML | 1 | 4490 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600500 | 5ML | 1 | 電詢 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD601000 | 10ML | 1 | 電詢 |
五、RAW 264.7細胞簡述：
RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞. 此細胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。