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Zeta Life 高效DNA RNA 轉染試劑-高效轉染
閱讀：1632 發布時間：2021-11-25Zeta Life Advanced 系列高效DNA RNA 轉染試劑使用說明
品牌：Zeta Life
名稱：Advanced 系列高效DNA RNA 轉染試劑
㈠注意事項
1、質粒DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于Buffer。溶解于Buffer
的質粒轉染效率會下降80%左右，甚至會轉染失敗。
2、質粒必須去除內毒素，內毒素對細胞將產生很大的細胞毒性，會導致轉染效率下降
70%-80%左右，甚至導致轉染失敗（推薦使用Qiagen、TIANGEN、Omega 去內毒素質粒提
取試劑盒）。
3、Zeta Life Advanced 系列高效DNA RNA 轉染試劑在復合物的制備過程中是絕對不能
用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉染試劑兩者按1:1 比例直接混
合，如果進行了稀釋會導致轉染失敗（80%的客戶會按Lipo 的方法進行稀釋）。
4、轉染試劑與核酸混勻后用移液器吹打10-15 次，室溫孵育10-15 分鐘后即可加入細
胞培養板。
5、轉染24 小時后進行正常換液，不能像Lipo2000 一樣轉染4-6 小時后換液。
㈡簡易操作說明
一、實驗中核酸準備要求：
1、RNA 濃度20 uM /L。
2、質粒DNA 濃度200 ng-2 ug/u（l 注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內毒素）。
二、操作流程
1、先將細胞接種到細胞培養板，細胞匯合度在60-80%左右，再進行轉染。
2、復合物制備：將核酸與轉染試劑按照1:1 關系直接混合，用移液器吹吸10-15 次混
勻，室溫靜止10-15 分鐘。
3、將復合物加入細胞培養板，并輕輕混勻，放入培養箱中繼續培養。
4、轉染24 小時后對細胞進行正常換液。
5、質粒DNA 轉染48-72 小時后熒光檢測轉染效率，48-96 小時檢測mRNA 或蛋白表
達。若進行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。
siRNA 轉染后9 小時熒光檢測轉染效率，48-72 小時檢測mRNA 或蛋白表達。
三、以細胞培養板、培養皿、培養瓶為例進行轉染試劑、質粒DNA 及siRNA 的用量