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流式細胞增殖-實驗原理介紹

閱讀:708          發布時間:2022-8-17


技術原理

EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine),中文名為5-乙炔基-2' -脫氧尿苷,是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷,thymidine)類似物,EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。另一方面,EdU上的乙炔基能與熒光標記的小分子疊氮化物探針(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通過一價銅離子的催化發生共價反應,形成穩定的三唑環,該反應非常迅速,被稱作點擊反應(Click reaction),通過點擊反應,新合成的DNA會被相應的熒光探針所標記,從而可以使用適當的熒光檢測設備檢測到增殖的細胞。

實驗方法

Step1:細胞培養

Step2:轉染或藥物處理

Step3:加EDU試劑

Step4:細胞收集

Step5:上機檢測

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