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A549、HT-29、CAL-27、MDA-MB-231細胞培養技術分享
閱讀：910 發布時間：2024-2-27影響影子：IF:16.6
發表期刊:Nature Communications
Doi: 10.1038/s41467-022-28213-y
原文標題：Electron transfer-triggered imaging of EGFR signaling activity。
背景：生物過程中的能量轉移是通過電子和質子的轉移來實現的,在腫瘤發展進程中，與正常細胞相比，腫瘤細胞實現了極其活躍的電子轉移，以支持其增殖、分化和遷移。如果能夠通過監測與腫瘤增殖相關信號通路的電子轉移，則有可能在此基礎上進行治療干預。
方法：研究了用于電子轉移觸發成像的ETTE納米探針在腫瘤治療過程中的動態監測。通過納米探針設計，免疫熒光，western蛋白印跡等方法探究了使用ETTEE納米探針作為顯像劑，在A549肺癌細胞中對EGFR信號通路活性進行成像的效果。通過免疫組化，小鼠活體成像等方法并利用肺癌小鼠模型評估了ETTE納米探針在腫瘤治療過程中對EGFR信號通路活性的動態監測能力。
結果：我們設計的ETTE納米探針，通過使用二茂鐵-DNA聚合物鏈，在信號通路激活過程中將轉移的電子改變為光信號，可以在時間和空間尺度上進行活體成像。進一步在A549細胞中使用ETTE納米探針對EGFR信號通路進行成像驗證了EGFR激活水平較高的細胞可以產生更強的信號，即在細胞水平上，EGFR相關信號通路的激活可以通過ETTE納米成像探針實現可視化。基于腫瘤治療過程中EGFR活性下降我們進一步利用ETTE納米探針對腫瘤治療過程進行動態監測，結果顯示治療組腫瘤部位有更弱的信號。
結論：綜上所述，我們的研究表明，ETTE納米探針可以在腫瘤治療過程中實現對EGFR信號通路活性的動態監測，并有望在后續的治療決策和預后中發揮關鍵作用。
文章引用：
Cell Culture
A549 cells: A549 cells derived from two different sources, American Type Culture Collection (ATCC) and China Center for Type Culture Collection (CCTCC). The A549 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
HT-29 cells: HT-29 cells were derived from CCTCC. The HT-29 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
CAL-27 cells: CAL-27 cells were derived from CCTCC. The CAL-27 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
MDA-MB-231 cells: MDA-MB-231 cells were derived from CCTCC. The MDA-MB-231 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco™, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA).
文章培養細胞方法總結
A549、HT-29、CAL-27、MDA-MB-231細胞均使用ZETA life含有10%血清及1%青/鏈霉素的高糖DMEM培養基培養，MDA-MB-231細胞使用含有10%血清的高糖DMEM培養基培養。上述細胞正常培養后，提取細胞蛋白，通過Western blot檢測EGFR表達水平。同時，培養的A549細胞移植到小鼠體內，并通過活體成像實時觀察腫瘤生長情況。結果表明，使用ZETA life胎牛血清培養的A549細胞移植后，能夠形成穩定的小鼠腫瘤模型。（備注：A549：人非小細胞肺癌細胞；HT-29 ：人結腸癌細胞；CAL-27：人舌鱗癌細胞；MDA-MB-231：人乳腺癌細胞。）
引用產品
胎牛血清fetal bovine serum (Zeta life, USA) ；
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ZETA life FBS（胎牛血清）簡介：
美國ZETA life公司成立于1989年，是國際無血清細胞培養基DMEM/F12主要完成人，有幾十年的胎牛血清、無血清細胞培養基、以及干細胞、免疫細胞及腫瘤細胞等多種不同類型哺乳動物細胞的無血清培養液生產經驗；ZETA life也是目前世界胎牛血清、無血清培養基最大的OEM供應商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫師檢驗證明及品質測試報告；ZETA life胎牛血清在100級的無菌間采用全自動方式制造生產，具有良好的可再現性及可追溯性。