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  在市場上購買的商品化脫水培養(yǎng)基，大多數(shù)廠家已經(jīng)調(diào)整了pH到正確范圍內(nèi)，只需加水溶解后滅菌即可使用，有些培養(yǎng)基因成分原因或受其他因素的影響，導(dǎo)致滅菌后的pH不在范圍內(nèi)，需要進(jìn)行調(diào)整。

培養(yǎng)基pH的規(guī)定：

  培養(yǎng)基滅菌前后通常會有變化，大多數(shù)培養(yǎng)基以滅菌后的pH為準(zhǔn)，《GB4789.28 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》中規(guī)定，“除特殊說明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時，pH應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)pH±0.2范圍內(nèi)。一般使用濃度約為40g/L（約1mol/L）的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L）的鹽酸溶液調(diào)整培養(yǎng)基的pH。如需滅菌后進(jìn)行調(diào)整，則使用滅菌或除菌的溶液。"

影響培養(yǎng)基pH的因素：

  1.滅菌溫度和時間

  市場上售賣的高壓蒸汽滅菌鍋性能存在差異，滅菌鍋整個滅菌過程的持續(xù)時間會導(dǎo)致培養(yǎng)基pH的變化不同。特別是對于一些含糖量較高又不含緩沖體系的培養(yǎng)基（如沙氏葡萄糖瓊脂、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基等）影響更大，一些小型的滅菌鍋滅菌較快，培養(yǎng)基中的成分變化較小，滅菌后的培養(yǎng)基pH相對比較穩(wěn)定，而一些大型滅菌鍋或滅菌柜則不相同，整個滅菌過程持續(xù)時間比較長，而且受裝載量、內(nèi)部物品分布等因素影響，滅菌后的培養(yǎng)基通常pH會偏低（主要是因?yàn)榕囵B(yǎng)基中的糖類成分在高溫下會出現(xiàn)焦化現(xiàn)象，溫度越高，高溫持續(xù)時間越久，焦化現(xiàn)象越明顯，直觀上表現(xiàn)為培養(yǎng)基的pH下降和顏色加深）。因此，在使用大型滅菌鍋制備大量培養(yǎng)基時，應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌工藝驗(yàn)證，若滅菌后的pH不正確，可在滅菌前進(jìn)行調(diào)整。

  2.培養(yǎng)基的保溫時間

  一些瓊脂培養(yǎng)，滅菌后可能不會立即使用，許多人會選擇放50℃左右水浴保溫，也有些人會選擇直接燜在滅菌鍋里保溫。水浴保溫相對影響較小，而滅菌鍋的溫度相對較高，保溫過程易造成培養(yǎng)基內(nèi)的糖類焦化，導(dǎo)致培養(yǎng)基pH下降。因此，滅完菌的培養(yǎng)基應(yīng)及時從滅菌鍋取出，在50℃左右保溫一般不超過4h，可繼續(xù)使用。

  3.培養(yǎng)基的反復(fù)溶化

  已凝固的培養(yǎng)基，再次融化時需要加熱處理，相當(dāng)于增加了培養(yǎng)基的受熱時間，復(fù)溶次數(shù)越多，培養(yǎng)基pH變化越大，同時也會導(dǎo)致瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降。因此，已凝固的培養(yǎng)基通常只允許復(fù)溶一次使用。

  4.培養(yǎng)基的溶解過程

  大多數(shù)廠家的培養(yǎng)基標(biāo)簽上都寫著滅菌前需進(jìn)行加熱溶解，加熱后再進(jìn)行滅菌的培養(yǎng)基溶解比較均勻，而且有利于滅菌過程中的熱穿透，若滅菌前未進(jìn)行加熱滅菌，易導(dǎo)致培養(yǎng)基pH變化不穩(wěn)，特別是含瓊脂的培養(yǎng)基，滅菌前不加熱易導(dǎo)致培養(yǎng)基分布不均勻，滅菌不CHEDI。含碳酸鹽的培養(yǎng)基，滅菌前不加熱易導(dǎo)致滅菌后的培養(yǎng)基pH偏低。

  5.水質(zhì)問題

  若配制培養(yǎng)基使用的水質(zhì)不佳，偏酸或偏堿，或含有一些離子，都有可能會導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH出現(xiàn)偏差。

  6.添加成分的影響

  有些培養(yǎng)基在滅菌后需添加一些營養(yǎng)成分增強(qiáng)營養(yǎng)或增加選擇性，一些添加劑會對培養(yǎng)基的pH造成較大影響，如L-半胱氨酸鹽酸鹽酸性較強(qiáng)，加入培養(yǎng)基后會導(dǎo)致pH下降，因此應(yīng)預(yù)先對培養(yǎng)基的pH進(jìn)行調(diào)整，確保加入特定成分后的培養(yǎng)基pH依然在合格范圍內(nèi)。

  7.測量溫度

  在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定測定培養(yǎng)基的pH應(yīng)以25℃為準(zhǔn)，大多數(shù)沒有緩沖體系的營養(yǎng)類培養(yǎng)基pH隨著溫度降低而升高，測量溫度不對時會導(dǎo)測量的pH出現(xiàn)偏差，有些pH計(jì)雖然有溫度補(bǔ)償功能，但是這個模式并不能WANQUAN適用于培養(yǎng)基的測定，因此必須要在25℃時測定培養(yǎng)基的pH。

  8.pH計(jì)的準(zhǔn)確度

  受緩沖液的配制、校準(zhǔn)過程等各種因素影響，pH計(jì)的準(zhǔn)確度也會存在誤差，這種誤差是不可避免的，大多數(shù)pH計(jì)的廠家認(rèn)為誤差范圍應(yīng)控制在±0.05以內(nèi)。

培養(yǎng)基pH的調(diào)整：

  通常可使用1mol/L的鹽酸和氫氧化鈉進(jìn)行調(diào)整，也可使用碳酸鈉、酒石酸或蘋果酸等弱堿弱酸進(jìn)行調(diào)整，有些特殊的培養(yǎng)基，如培養(yǎng)軍團(tuán)菌用的BCYE、GVPC培養(yǎng)基，因鈉離子對軍團(tuán)菌生長不利，需要用氫氧化鉀進(jìn)行調(diào)整pH。