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用于去除 GST 標簽的 PreScission 蛋白酶

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更新時間:2025-06-09 19:27:24瀏覽次數:42評價

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用于去除 GST 標簽的 PreScission 蛋白酶PreScission 蛋白酶PreScission 蛋白酶是人鼻病毒 (HRV) 3C 蛋白酶和 GST 的融合蛋白。可一步完成 GST 標簽的層析柱上裂解和蛋白純化。 PreScission 蛋白酶應用用于將 GST 標簽與使用 pGEX-6P 載體表達的蛋白進行位點特異性分離酶切緩沖液50 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、1 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA)、1 mM 二硫蘇糖醇 (DTT)、pH 7.0洗脫緩沖液50 mM Tris-HCl、10 mM 還原型、pH 8.0抑制劑100 mM ZnCl2(50% 抑制率);100 µM 抑制素;4 mM Pefabloc分子量 (Mr)46000供應方式2000 單位/ml(833 ~ 1000 單位/mg)的 50 mM Tris-HCl (pH 8.0)、150 mM NaCl、10 mM 乙二胺四乙酸、1 mM DTT 和 20% 甘油溶液。單位定義溫度為 5°C、pH 為 7.0 的條件下培養 ......
PreScission 蛋白酶是人鼻病毒 (HRV) 3C 蛋白酶和 GST 的融合蛋白。可一步完成 GST 標簽的層析柱上裂解和蛋白純化。
  • 識別 LeuGluValLeuPheGln/GlyPro 序列并在Gln 殘基與 Gly 殘基之間進行特異性酶切。
  • 省時——可以酶切 GST 標簽蛋白,同時仍與親和層析填料結合。
  • 孵育溫度低——能夠低溫酶切包含 HRV 3C 蛋白酶識別序列的融合蛋白。

層析柱上或層析柱外酶裂解

當融合蛋白仍與 Glutathione Sepharose 4B、Glutathione Sepharose High Performance 或 Glutathione Sepharose 4 Fast Flow 親和層析填料結合時,只需一步即可去除 GST 標簽和蛋白酶。另一個選擇是使用還原型洗脫帶 GST 標簽的蛋白質,裂解,然后使樣品通過相同的層析填料以去除蛋白酶和標簽。

與其他常規蛋白酶(例如和 Xa 因子)不同,這種帶 GST 標簽的融合蛋白可以通過結合對 GST 具有親和力的層析填料而輕松去除。其他非重組蛋白質酶需要使用不同的層析填料進行額外的純化步驟。

編碼 HRV 3C 蛋白酶識別序列的載體

pGEX-6P 載體 pGEX-6P-1、pGEX-6P-2 和 pGEX-6P-3 編碼此 3C 蛋白酶的識別序列。

成功用于已發表研究

PreScission 蛋白酶在多種研究應用中用于執行酶切,包括:

  • 泛素化蛋白中所涉及蛋白的層析柱上裂解和純化
  • 從包涵體中對帶 GST 標簽的蛋白質進行裂解和純化,用以研究丙型肝炎病毒離子通道復合物的形成

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