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伊萊博生物科技(上海)有限公司
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成年小鼠關節軟骨細胞原代培養

時間:2024/3/19閱讀:852
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1. C57小鼠,8-10周,通過頸椎脫位處死浸入75%乙醇浸泡5分鐘,轉移到通風柜中的解剖盤中。

2. 使用眼科剪和鑷子,使髖關節脫臼,保持股骨頭完整

3. 用止血鉗去除每個股骨頭的軟骨帽,將組織放入含2%雙抗的PBS中。

4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,將關節軟骨小心移到2ml離心管中。

5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,加入3ml預熱的Collagenase D1.5mg/ml)。

6. 放入37℃、80rpm的搖床中進行第一次消化,時間2h

7. 第一次消化結束后,加入含血清的培養基終止消化,40um的細胞篩過濾后,離心1500rpm2min

8. 沉淀用DMEM培養基重懸,計數,種植在24孔板中。

9. 在未消化的組織中加入3ml預熱的Collagenase D,放入37℃、80rpm的搖床中進行第二次消化,時間2h,然后收集細胞。


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