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固相萃取儀基本操作四步走介紹
閱讀：961 發布時間：2021-6-15
固相萃取儀（SPE）是近年發展起來一種樣品預處理技術，由液固萃取和柱液相色譜技術相結合發展而來，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預處理過程，操作簡單、省時、省力。廣泛用在醫藥、食品、環境、商檢、化工等領域。
固相萃取儀操作“四步走”規定：
1.活化
萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤，因為填料干燥會降低樣品保留值，而各小柱的干燥程度不一，也會影響回收率的重現性。先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料，因為甲醇能潤濕吸附劑表面，并滲透到非極性的硅膠鍵合相中，使硅膠更容易被水潤濕；然后再加入水或緩沖液沖洗，創造和樣品溶劑相容的環境并提高回收率。
2.上樣
①用0.1mol/L酸或堿調節，使pH=9，離心取上層液萃取；
②用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質后取上清液，以水或緩沖液稀釋后萃取；
③用酸或無機鹽沉淀蛋白質后取上清液，調節pH值后萃取；
④超聲15min后加入水、緩沖液，取上清液萃取。流速應控制為1ml/min，流速快不利于待測物與固定相結合。
3.淋洗
反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液，可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積，而SPE濾膜為5-10ml。
4.洗脫
應選用5-10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度，則可先將洗脫液揮干后，再用流動相重組殘留物后進樣。體內樣品洗脫后多含有水，可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物，再用極性較強的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。
若待測物可電離，可調節pH值，抑制樣品離子化，以增強待測物在反相SPE填料中的保留，洗脫時調節pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫，收集洗脫液后再調節pH值使其在HPLC分析中達到理想分離效果。在洗脫過程中應減慢流速，用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫，回收率更高。