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總糖的測定---蒽酮比色法
一、實驗?zāi)康?nbsp;
掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法。
二、實驗原理
強酸可使糖類脫水生成糠醛，生成的糠醛或羥甲基糖醛與蒽酮脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍綠色，該物質(zhì)在620nm處有大吸收。在10-100ug范圍內(nèi)其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量在 30ug左右就能進行測定，所以可做為微量測糖之用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較合適。
三、儀器、試劑和材料
1 .儀器
(1) 分光光度計
(2) 電子頂載天平
(3) 三角瓶： 50m1 X 1
(4) 大試管： 9 支
(5) 試管架，試管夾
(6) 漏斗，漏斗架
(7) 容量瓶： 50 m1 X 2
(8) 刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1
(9) 水浴鍋
2 .試劑
(1) 葡萄糖標準液： l00ug/ml
(2) 濃硫酸
(3) 蒽酮試劑:0.2g 蒽酮溶于100ml濃 H2SO4中當日配制使用。
3 .材料
小麥分蘗節(jié)（或者其它材料）。
四、操作步驟
1 .葡萄糖標準曲線的制作
取7支大試管，按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液：
管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
葡萄糖標準液（ ml ） | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.6 | 0.8 |
蒸餾水（ ml ） | 1 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.4 | 0.2 |
葡萄糖含量（ ug ） | 0 | 10 | 20 | 30 | 40 | 60 | 80 |
在每支試管中立即加入蒽酮試劑 4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水?。ㄋ″仯┲?，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準確煮沸 l0min 取出，用流水冷卻，室溫放置 10min ，在 620 nm 波長（分光光度計）下比色。以標準葡萄糖含量（ug) 作橫坐標，以吸光值作縱坐標，作出標準曲線。
2 .植物樣品中可溶性糖的提取
將小麥分蘗節(jié)剪碎至 2mm 以下，準確稱取 1g（電子天平）, 放入 50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加蓋煮沸10min ，冷卻后過濾，濾液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1(移液槍) ，置另一50m1 容量瓶中，以蒸餾水稀釋定容，搖勻測定。
3 .測定
吸取lml 已稀釋的提取液于大試管中，加入4.Oml 蒽酮試劑，以下操作同標準曲線制作。比色波長 620nm ，記錄吸光度，在標準曲線上查出葡萄糖的含量（ug）。
查表所得糖含量(ug)×稀釋倍數(shù)
五、注意事項
1 該顯色反應(yīng)非常靈敏，溶液中切勿混入紙屑及塵埃。
2 H 2 SO 4 要用高純度的。
3 不同糖類與蒽酮的顯色有差異，穩(wěn)定性也不同。加熱、比色時間應(yīng)嚴格掌握。