產品規格 （CAT#: DL2050）

BW25113:                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                     10μl

保存條件（保質期）：                         -80℃（6個月）

基因型

F-, DE(araD-araB)567, lacZ4787(del)::rrnB-3, LAM-, rph-1, DE(rhaD-rhaB)568, hsdR514

產品說明

BW25113菌株來源于E. coli K-12 W1485，是K12的衍生菌株，與MG1655類似，也是一種經過較少改造，比較接近于“野生型”的大腸桿菌工程菌株。BW25113作為母系菌株，可以用來制作E. coli Keio Knockout 文庫；同時可作為大腸桿菌模式菌株使用，用來制作各種基因的Knockout突變體。另外，BW25113可用于構建，擴繁質粒使用，不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質粒被降解。pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BW25113感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項

1. 感受態細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。