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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠
感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。K599 發(fā)根農(nóng)桿菌（NCPPB2659）含
有 pRi2659 農(nóng)桿堿型 Ri 質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（葫蘆科，豆科，茄科等），同時(shí)具有鏈m素
抗性。本公司生產(chǎn)的 K599 化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301
質(zhì)粒（卡那m素
抗性）檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
K599
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
10 ×50 μL
100 ×50μL
定制
基因型：Agrobacterium rhizogenes (StrR ) pRi2659 (agropine type)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存; 請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除農(nóng)桿堿型 Ri 質(zhì)粒 pRi2659 外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷；或者將儲(chǔ)存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺(tái)中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預(yù)冷；
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質(zhì)粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開(kāi)啟電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)（2500V ，200Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入 900μl 無(wú)抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無(wú)菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)。
（注：此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進(jìn)行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平
板 上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天。
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的 1/10；
2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量；
3. 平板上陽(yáng)性克隆密度不宜過(guò)大，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或最終用于涂板的菌量；
4. K599 具有鏈m素抗性，不可用于具有鏈m素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
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