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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
Rosetta-gami B 系列菌株來源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列菌株和
Origami 系列菌株的優(yōu)點(diǎn)，極大的增強(qiáng)了細(xì)胞內(nèi)二硫鍵的形成和含有在大腸桿菌中稀有密碼子的真
核細(xì)胞蛋白的表達(dá)能力。本菌株含有 pRARE 質(zhì)粒，能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA,
AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個(gè)稀有密碼子的 tRNA，增加了真核細(xì)胞的在大腸桿菌中的蛋白
表達(dá)水平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同時(shí)含有突變，這使得
該菌株能夠更加高效地在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵，有助于表達(dá)含二硫鍵的活性蛋白。pRARE 質(zhì)粒帶
有氯m素抗性，同時(shí)基因 trxB 和 gor 的突變使得該菌株具備了卡那和四環(huán)素抗性，所以本菌株無法
用于含氯m素、卡那和四環(huán)素抗性質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Rosetta-gami B(DE3)系列菌株是來源于
Origami B 系列菌株，其中 DE3 是溶源性的 λDE3, 所以帶有 T7 RNA 聚合酶的染色體拷貝。該菌株
適用于 pET 系列載體，及其他 T7 啟動(dòng)子系列載體。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，Rosetta-gami B(DE3)
感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta-gami B(DE3)
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F– ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pRARE 質(zhì)粒外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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