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攻略 色譜流動相使用不當引發的諸多問題你中了幾招……
流動相相當于液相色譜系統的血液，可以想象流動相在整個分離過程中的重要程度。那么流動相在具體應用過程中都需要注意什么呢？
01過濾溶劑
溶劑在使用前一定要用0.5μm的過濾器過濾，如果使用固體化學試劑（緩沖鹽）配制流動相，過濾特別重要，不能讓固體微粒污染泵，阻塞進樣器和柱頭過濾片。本實驗室有水溶性和脂溶性兩種過濾膜供選擇（反光面朝上），過濾水溶性流動相時（如甲醇/水），先用1～2mL甲醇潤濕過濾膜，有助于快速抽濾。
02保持儲液瓶的清潔
用普通溶劑瓶作流動相儲液器應不定期廢棄瓶子，后一次應用HPLC級的水或溶劑清洗，不能在清洗過程中留下污跡。
03保證溶劑的質量
一定要用HPLC級的溶劑，水也應達到HPLC級，同樣也要使用高純度的緩沖鹽。
一些流動相引起的常見
01 流動相脫氣不充分
流動相受熱，或者流動相不同組分混合時會有氣體產生，氣泡進入泵內引起壓力波動，增加噪音，色譜圖上出現毛刺。可試用下列方法解決問題：流動相再脫氣;采用更有效的脫氣方法或兩種方法配合使用;改系統內混合為系統外預混合。
02 流動相供給不暢
流動相用完，管道中吸入氣體引起泵壓力不穩。應經常觀察儲液器中流動相的量，加足流動相保證所有的樣品分析完畢。輸液管道上裝沉子沉至瓶底，儲液器蓋上留一小孔正好夾住進液管，使其不能上下移動。
過濾器阻塞引起管道和泵腔空化，壓力不穩。過濾器被微粒所阻塞或長霉，去掉過濾器后如果系統運轉正常，說明已找出問題，換上新的過濾器則可。有時候換上新的過濾器仍然不暢，那就需要查查流動相的制備過程，或者換大孔徑的過濾器。不管如何，流動相都需要重新過濾。
流速過高、阻力大，造成空化現象，這是由于過濾器孔徑、管道內徑、流速和溶劑黏度等引起的。如果流速大于10mL/min，常會出現這種現象。
解決方法如下：
(1)使用低流速;
(2)換大孔徑的過濾器;
(3)增加進液管道內徑;
(4)抬高或加壓儲液器;
(5)不用過濾器，但流動相一定要先過濾;
(6)儲液器蓋子太緊，在儲液器內形成真空，打出的流動相不連續。應松開蓋子或留有1mm的縫隙;
(7)進液管道阻塞或彎曲使泵抽不到液，注意調整進液管道或更換新的。其它問題包括滲漏或接頭松動、泵部件損壞等，都能引起供液不正常。
03 流動相和儲液器被污染
由于污染，噪音越來越大，檢測器基線上升。污染物可能被泵以穩定的濃度打入系統，而再以穩定的濃度流出來，所以在色譜圖中不出多余的峰。用梯度洗脫時弱流動相可以使污染物聚在柱頂，流動相強度增加后污染物可能被洗脫出來一個大的偽峰。有時基線噪音突然增大或突然提高，都是因為反復加進新的流動相或系統用得太久(通宵)所造成的。新加進的流動相有污染物或者流動相長霉，繁殖了細菌。
臟的儲液器會污染清潔的流動相。每種流動相備有的儲液器，或者定期報廢儲液器。
04 流動相污染原因及解決方法
試劑質量不高，玻璃器皿不合格; 因此要求高純度化學試劑和HPLC級溶劑;玻璃器皿按規定清洗干凈。
微生物的影響; 為防止微生物生長，每天要用甲醇清洗系統;懷疑系統內生長了微生物，可用稀硝酸沖洗即可(注意不要損壞柱和管道系統)。
配制流動相時操作不當等; 真空脫氣時防止泵油帶入流動相;用清潔的惰性塞子、攪棒、過濾器和玻璃器皿配制流動相。
已經污染的流動相一定要廢棄掉。