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你知道著名的高效液相色譜法特點以及使用方法嗎
閱讀：1645 發布時間：2020-9-15
高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點：
①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。
②高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到優質分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
③高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在µL數量級。
④應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。
⑤分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成，一般小于1h。
此外HPLC還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。HPLC的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間(進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。HPLC檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
色譜柱的填料和流動相的組分應按各品種項下的規定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠很是常用,辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用；離子交換填料,用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等，用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數微升。除另有規定外，柱溫為室溫，檢測器為紫外吸收檢測器。
在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求。
正文中各品種項下規定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當改變,
以適應具體品種并達到系統適用性試驗的要求。一般色譜圖約于20分鐘內記錄完畢。 2.系統適用性試驗
按各品種項下要求對儀器進行適用性試驗，即用規定的對照品對儀器進行試驗和調整,應達到規定的要求；或規定分析狀態下色譜柱的小理論板數、分離度和拖尾因子.