細胞傳代培養詳解（實戰總結）

細胞傳代培養詳解（實戰總結）

1、什么是細胞培養

培養的細胞由于細胞增殖，數量增加，細胞難以繼續生長繁殖，需要進行分瓶培養，將培養的細胞分散，以1:2或1:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養，一般細胞可傳代10-50代

2、細胞的貼壁過程

3、培養細胞的一代生長過程

①潛伏期：細胞從接種到貼壁生長繁殖的一段時間

二倍體細胞系該段時間較長，大概為24-96h；連續細胞系時間短，大概10-30min

②指數生長期：細胞增殖最旺盛時期，此時進行細胞實驗較佳

指數生長期持續3-5d后，隨細胞數量不斷增多，生長空間日趨減少，細胞相互接觸匯合成片，呈現接觸抑制。而惡性細胞則無接觸抑制現象；癌細胞則由于營養成分的消耗和細胞代謝產物的影響而發生密度抑制。

③停滯期：細胞數量達到飽和密度后，細胞與營養液的交換面積減少，代謝產物積累，pH下降細胞停止增殖，進入停滯期。此時應該進行細胞傳代，但是得傳1-2代細胞才能恢復。

4、細胞傳代的一般步驟

a、懸浮細胞

可采用加入等量新鮮培養基后直接吹打分散進行傳代，或用離心法后，加入新培養基后再吹打分散進行傳代

b、貼壁細胞

①實驗準備，超凈臺噴灑酒精，紫外照射30min。準備好培養瓶/皿，離心管，10%DMEM，0.25%胰酶，D-hanks液等，帶上手套等

②倒去舊培養基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉積的死細胞等

③加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細胞單層收縮突起出現空隙時，倒去酶液。

④加入1～2滴管含有血清的培養液，反復吹打細胞，使其成細胞懸液

⑤以1：2或1：3進行分裝，補充新鮮培養基，并在培養瓶上做好標記，注明代號、日期，輕輕搖勻，37℃CO2培養箱培養。

⑥細胞培養24h后，即可觀察培養液的顏色及細胞的生長情況

5注意事項

①傳代培養時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次最好只進行一種細胞的操作

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