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了解一下生物熒光顯微鏡的使用方法及注意事項(xiàng)吧
另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
下面讓我們一起來(lái)了解一下生物熒光顯微鏡的使用方法及注意事項(xiàng)吧。
一、使用方法
(1)打開(kāi)燈源，超高壓汞燈要預(yù)熱15min才能達(dá)到最亮點(diǎn)。
(2)透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊。
(3)用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號(hào)熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心，使其位于整個(gè)照明光斑的中央。
(4)放置標(biāo)本片，調(diào)焦后即可觀察。使用中應(yīng)注意:未裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷;用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，必須用無(wú)熒光的特殊鏡油;高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開(kāi)，需待汞燈*冷卻后才能再啟動(dòng)，否則會(huì)不穩(wěn)定，影響汞燈壽命。
(5)觀察。例如:在熒光顯微鏡下用藍(lán)紫光濾光片，觀察到經(jīng)0.01%吖啶橙熒光染料染色的細(xì)胞，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。
二、注意事項(xiàng)
(1)嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。
(2)應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，點(diǎn)燃超高壓汞燈5~15min，待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后，眼睛*適應(yīng)暗室，再開(kāi)始觀察標(biāo)本。
(3)防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
(4)檢查時(shí)間每次以1~2h為宜，超過(guò)90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱;所以，最多不得超過(guò)2~3h。
(5)熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開(kāi)始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí)，須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。
(6)標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)。長(zhǎng)時(shí)間的激發(fā)光照射標(biāo)本，會(huì)使得熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射時(shí)間。暫時(shí)不觀察時(shí)可用擋光板遮蓋激發(fā)光。
(7)標(biāo)本觀察時(shí)候應(yīng)采用無(wú)熒光油，應(yīng)避免眼睛直視紫外光源。
(8)電源應(yīng)安裝穩(wěn)壓器，電壓不穩(wěn)會(huì)降低熒光燈的壽命。
熒光顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的區(qū)別
熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別:
1.照明方式通常為落射式，即光源通過(guò)物鏡投射于樣品上;
2.光源為紫外光，波長(zhǎng)較短，分辨力高于普通顯微鏡;
3.有兩個(gè)特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見(jiàn)光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護(hù)人目。
熒光顯微鏡也是光學(xué)顯微鏡的一種，主要的區(qū)別是二者的激發(fā)波長(zhǎng)不同。由此決定了熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法上的不同。
熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過(guò)物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。