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使用顯微鏡拍照時(shí)怎樣設(shè)置數(shù)值孔徑與光強(qiáng)度
在使用顯微鏡的時(shí)候，因?yàn)椴皇且曨l顯微鏡，不能即時(shí)保存圖片，往往是需要直接拍照的，那么在使用顯微鏡拍照的時(shí)候需要怎么弄呢？該如何設(shè)置數(shù)值孔徑與光強(qiáng)度呢？今天沃德普儀器給大家介紹一下在使用顯微鏡時(shí)，需要拍照的時(shí)候，怎樣設(shè)置數(shù)值孔徑跟光強(qiáng)度，才可以拍出合適的照片。
現(xiàn)在一般使用的感光膠片，在一定的曝光時(shí)間范圍內(nèi)，像的亮度與所需曝光時(shí)間呈反比關(guān)系。只要合適的曝光量不變，就能得到正確曝光的底片，這種原理稱為倒易律法則。自動(dòng)曝光控制器正是通過倒易律法則根據(jù)像的亮度確定曝光時(shí)間的。
但是顯微鏡如果曝光時(shí)間超出這一范圍。顯微鏡特別是當(dāng)由于像的亮度太低而使用待別長(zhǎng)的曝光時(shí)間時(shí)，倒易律法則就失去效用，如果用自動(dòng)曝光控制器所測(cè)定的時(shí)間進(jìn)行曝光，底片會(huì)出現(xiàn)曝光不足的現(xiàn)象，看起來似乎膠片的感光速度變得低于它原來的速度，例如當(dāng)膠片上的光強(qiáng)度(即像的亮度)降至一般光強(qiáng)度的1/50時(shí)，顯微鏡原來的Z佳曝光時(shí)間將不是延長(zhǎng)50倍，而是延長(zhǎng)100倍或更長(zhǎng)，這種現(xiàn)象被稱為倒易律失效，尼康顯微鏡主要是由照相材料的特性所決定的。這個(gè)效應(yīng)在彩色顯微照相中更為明顯。
當(dāng)然，在亮度較低的黑白顯微照相中也會(huì)遇到。在有些新型的自動(dòng)曝光控制器上，已經(jīng)設(shè)計(jì)有倒易律失效的矯正盤，并且附有一張用于各種類型膠片的矯正指數(shù)表。在進(jìn)行顯微攝影時(shí)根據(jù)所用膠片的型號(hào)和曝光速度，查出矯正指數(shù)，顯微鏡然后把曝光控制器上的旋鈕旋到該指數(shù)刻度，數(shù)碼顯微鏡就可對(duì)倒易律失效進(jìn)行有效地矯正。從中可以看出，矯正指數(shù)不僅與膠片的型號(hào)有關(guān)，而且主要與膠片的感光速度有關(guān)。膠片的感光速度愈高，所用的矯正指數(shù)愈大，也就是說倒易律失效的影響愈大。關(guān)于各個(gè)矯正指數(shù)對(duì)于曝光時(shí)間的影響及矯正情況，可以看出，矯正指數(shù)愈大，表明對(duì)膠片曝光時(shí)間的矯正幅度愈大。例如，當(dāng)矯正指數(shù)為2時(shí)，矯正后的曝光時(shí)間為原來的2.26倍;當(dāng)矯正指數(shù)為6時(shí)，矯正后的曝光時(shí)間則為原來的11.6倍。
提示：現(xiàn)在所使用的許多自動(dòng)顯微攝影裝置都沒有用倒易律失效的矯正盤，有時(shí)當(dāng)不可避免地采用較長(zhǎng)的曝光時(shí)間時(shí)，根據(jù)所用膠片的性能查出矯正指數(shù)，然后中找出相應(yīng)的曝光時(shí)間矯正值，從而通過自動(dòng)曝光控制器上的膠片速度選擇盤或補(bǔ)償器延長(zhǎng)曝光時(shí)間，顯微鏡使倒易律失效得到矯正。
除了上面所敘述因素以外，還存在著一些其他的情況，當(dāng)然在這些情況下自動(dòng)曝光控制器無疑對(duì)于尋找正確的曝光時(shí)間是有很大的幫助，盡管這樣，一些實(shí)際經(jīng)驗(yàn)對(duì)于顯微攝影仍然是必需的。特別是在沒有自動(dòng)曝光控制器和曝光表的情況下，或者使用暗視野或熒光顯微鏡進(jìn)行顯微照相時(shí)，顯微鏡就B須在實(shí)驗(yàn)曝光的基礎(chǔ)上尋找正確的曝光時(shí)間，一般從一個(gè)Z短的，顯微鏡光時(shí)間開始每次增加一倍。例如采用1s, 2s, 1 s, 2 s, 4 s, 8 s, 16s等時(shí)間，通過一系列底片的曝光，尋找Z佳的曝光時(shí)間。在進(jìn)行這樣的一系列曝光時(shí)，B須小心地保持顯微鏡裝配和照明等一切條件不發(fā)生變化。
由于曝光時(shí)間與光的強(qiáng)度(表現(xiàn)為像的亮度)成反比，任何影響光強(qiáng)度的因素都將影響曝光時(shí)間。在實(shí)踐中一個(gè)Z容易發(fā)生的錯(cuò)誤是，當(dāng)一個(gè)正確的曝光時(shí)間已經(jīng)用曝光表測(cè)定后，在曝光之前顯微鏡工作者又重新精細(xì)地調(diào)節(jié)了集光器光闌，顯微鏡這就導(dǎo)致了膠片的不正確的曝光。金相顯微鏡在照相中當(dāng)照明調(diào)節(jié)及其他條件保持不變，而只是更換了物鏡或目鏡時(shí)，新的曝光時(shí)間可以通過光強(qiáng)度的計(jì)算而進(jìn)行估計(jì)。由于光的強(qiáng)度與有效數(shù)值孔徑商的平方，以及與總放大倍數(shù)商的平方成比例，顯微鏡因此第2次曝光時(shí)間(ETI)可以從第1次曝光時(shí)間(ETI)中得出式中:N.A.I和N.A. I分別是第1次和第2次曝光時(shí)物鏡的有效數(shù)值孔徑;Vi和VI分別是第1次和第2次曝光時(shí)顯微鏡的總放大倍數(shù)。當(dāng)然以這種方法計(jì)算的曝光時(shí)間只是一個(gè)近似值，因?yàn)榧馄骺讖缴系娜魏巫兓紩?huì)影響物鏡孔徑的有效利用。
顯微鏡想獲得清晰的顯微圖像，除了有熟練的技術(shù)之外，一臺(tái)好的合適的顯微鏡也是不能缺少的，只有硬件與軟件上的相互配合才可以更好的得出想要的圖像。沃德普儀器自成立以來，致力于視頻顯微鏡、LCD檢查顯微鏡、LED顯微鏡環(huán)形燈、顯微鏡測(cè)量軟件的市場(chǎng)開發(fā)與客戶配套方案解決，積累大量用戶體驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。