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P3023-pSuper.Retro.Puro-stuffer基因沉默質粒
  • P3023-pSuper.Retro.Puro-stuffer基因沉默質粒
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更新時間:2025-05-08 21:00:08

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pSuper.Retro.Puro-stuffer基因沉默質粒
核抗性Amp
真核抗性Puro
克隆菌株Stbl3
培養條件37℃
質粒宿主哺乳細胞,逆病毒
質粒用途基因沉默
原核抗性氨芐青霉素
真核抗性嘌呤霉素

注意事項:轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態名稱和培養溫度。
1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0  1*TE緩沖液來溶解質粒,室溫放置1min

2、從-80冰箱中取出相應的感受態,置于冰盒上解凍,并做好標記;

3、取2μl質粒加至100μl感受態中,冰浴30min

4、42熱激90s,再冰浴2min;

5、加入900μl無抗的LB液體培養基,180rpm震蕩培養45min

6、6000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;

7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

8、將平板正向培養1h,再倒置培養12h~16h;

9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養基中,震蕩培養12h~16h,根據實驗需要提取質粒

 

pFUGW-H1基因沉默質粒
pBV220-Cam蛋白表達質粒
pTrc99a-Kan蛋白表達質粒
pLentiCRISPRV2-ANO6(mouse)-sgRNA3基因編輯質粒
pLentiCRISPRV2-TRPC1(mouse)-sgRNA3基因編輯質粒
pLentiCRISPRV2-NANOG(human)-sgRNA1基因編輯質粒
pCAG-VSVP輔助包裝質粒
pCAG-VSVN輔助包裝質粒

 

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