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中級(jí)會(huì)員 | 第4年

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P22899-pET28a-NSP7(SARS-CoV-2)蛋白表達(dá)質(zhì)粒
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pET28a-NSP7(SARS-CoV-2)蛋白表達(dá)質(zhì)粒
啟動(dòng)子T7
復(fù)制子pBR322
克隆菌株DH5a
培養(yǎng)條件37度
備注249bp
質(zhì)粒宿主大腸桿菌
質(zhì)粒用途蛋白表達(dá)
片段類型ORF
片段物種病毒
原核抗性Kan

一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測(cè)序驗(yàn)證及結(jié)果交付

 

二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體;報(bào)告基因載體等;
2、基因定點(diǎn)突變,包括單點(diǎn)突變,多點(diǎn)突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建;
5、過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建。

 

pET28a-NSP8(SARS-CoV-2)蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pCDH-CMV-HA-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pLentiCRISPRV2-NF2(human)-sgRNA2基因編輯質(zhì)粒
pCDH-CMV-FLAG-MCS-EF1a-CopGFP-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pLVX-U6-CD274(human)-shRNA1-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-PPARG(mouse)-shRNA1-EF1a-ZsGreen(2A)Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-HDAC3(human)-shRNA2-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-U6-CD274(human)-shRNA2-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-U6-CD274(human)-shRNA3-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-HDAC3(human)-shRNA1-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLentiCRISPRV2-NF2(human)-sgRNA1基因編輯質(zhì)粒

 

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