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中級(jí)會(huì)員 | 第4年

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P23291-pBABE-CDK4(human)-P2A-CCND1(human)-SV40-Puro
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pBABE-CDK4(human)-P2A-CCND1(human)-SV40-Puro
啟動(dòng)子MMLV
復(fù)制子pUC
克隆菌株Stbl3
培養(yǎng)條件37度
質(zhì)粒宿主哺乳細(xì)胞,逆病毒
質(zhì)粒用途蛋白表達(dá)
片段類型ORF
片段物種人
原核抗性Amp
篩選標(biāo)記Puro

一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測(cè)序驗(yàn)證及結(jié)果交付

 

二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體;報(bào)告基因載體等;
2、基因定點(diǎn)突變,包括單點(diǎn)突變,多點(diǎn)突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建;
5、過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建。

 

pBABE-CDK4(human)-P2A-CCND1(human)-SV40-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-CCNDBP1(human)-shRNA1-PGK-EGFP(2A)Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-IQGAP1(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-RAB11FIP2(mouse)-shRNA2-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-IQGAP1(mouse)-shRNA2-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-RAB11FIP2(mouse)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Pur基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-EDAR(human)-shRNA5-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-EDAR(human)-shRNA6-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pCAG-VSVG輔助包裝質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-CSTF2(human)-shRNA2-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒

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