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細胞學堂 | 一文了解細胞爬片制作全過程
細胞爬片是一種將細胞培養在玻璃或塑料表面上，使其附著并擴展的技術。一般是讓玻片浸在細胞培養基內，使細胞在玻片上生長。這種技術可以用于觀察細胞形態、運動、細胞與細胞之間相互作用等。利用細胞爬片進行體外實驗可排除體內諸多干擾因素的影響，方便對細胞進行各種干預處理。
我們在做免疫熒光（IF）、原位雜交（FISH）、凋亡檢測（TUNEL）等實驗時，都需要制備細胞爬片，而爬片質量會影響到最后的圖片呈現效果以及實驗數據的精準性。本期細胞學堂為大家整理了細胞爬片的制作步驟及注意事項，幫助您快速上手開展實驗。
操作步驟
01
爬片準備
1
根據實驗選擇合適大小的爬片。
2
爬片處理，首先浸酸：5%稀鹽酸浸泡過夜（最好逐片浸入，多片同時浸入會引起多片粘連、浸洗不充分），第二天先用自來水沖洗20次，再用三蒸水沖洗2次（清除殘留酸液）。
3
將爬片置于無水乙醇浸泡過夜（浸洗脂類污漬），75%乙醇長期保存備用（無需高壓滅菌）。使用時鑷子取出爬片，酒精燈烘烤，放入孔板。
02
細胞爬片
1
收集貼壁細胞進行計數，按照實驗需求用完-全培養基稀釋細胞至合適濃度。
2
加細胞前，先在每個孔里準備放爬片的位置滴加少量培養基（目的是使爬片與培養皿靠液體的張力粘合到一起），然后輕放爬片（注意不要產生氣泡，防止加細胞懸液時爬片漂起）。整個過程注意無菌操作。
3
根據實驗需求接種合適細胞量到培養器皿內。
03
爬片的固定
固定液的選擇：
以多聚甲醛為例進行固定：
1
準備4%多聚甲醛（PFA），于4℃冰箱中保存，使用時常溫復溫。
2
在培養板中將已爬好細胞的爬片用PBS浸洗3次，每次3 min，輕輕晃動，避免將細胞沖掉。
3
用4%的多聚甲醛固定爬片15 min（細胞自帶熒光時注意避光），PBS浸洗爬片3次，每次3 min。
4
Triton X-100（PBS配制，濃度根據實驗調整）室溫通透20 min。
5
PBS浸洗爬片3次，每次3 min。
6
按實驗需求進行后續實驗。
04
細胞爬片封片
封片前根據實驗需求決定是否需要孵育抗體或復染核。孵育好后用PBS浸洗3次，用吸水紙吸干爬片上的液體，封片液封片。
注意事項
注：各個實驗室的操作流程都各有差異。此方案是我們實踐驗證可行的方案。
