Huh-7/Sorafenib耐藥細胞培養條件：*培養基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+5ug/ml  FU
血清我們推薦用:
GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。
培養條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

培養條件：
*培養基：90%DMEM +10%胎牛血清+2ug/ml Sorafenib
血清我們推薦用:
GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。
培養條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

 

傳代方法：
收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。 
3. 按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。
注：1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。
2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。
3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。
4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。
凍存方法：凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO
  儲存：液氮儲存 

 

支原體（mycoplasma） 污染的細胞， 是否能以肉眼觀察出異狀？
不能。除極有經驗之專家外，大多數遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之。
支原體污染會對細胞培養有何影響？
支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數， 代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。
CO2 培養箱之水盤如何保持清潔？
定期（至少每兩周一次） 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。
為何培養基保存于4 ℃ 冰箱中， 顏色會偏暗紅色， 且pH值會越來越偏堿性？
培養基保存于4 ℃ 冰箱中， 培養基內之CO2 會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑（通常為phenol red） 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果， 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時， 可以通入無菌過濾之CO2， 以調整pH 值。