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一、DNA提取方法簡介
1、基因組DNA的提取 | 1.1、CTAB法 | |
1.2、SDS法 | ||
1.3、其它 | ||
2、非基因組DNA的提取 | 2.1、質粒DNA的提取 | 2.1.1、堿裂解法 |
2.1.2、煮沸法 | ||
2.2、線粒體、葉綠體DNA的提取 | 差速離心結合SDS裂解法 | |
1、基因組DNA的提取
SDS法原理
SDS法DNA提取緩沖液
改良的SDS法
水浴 60min, 其間緩慢搖動幾次。加入150ul 的5mol/ LKac, 混勻, 冰浴15min 左右。
SDS法流程圖 （以動物組織為例）
1.3、其它
根據細胞裂解方式的不同有：
物理方式 | 玻璃珠法 |
研磨法 | |
超聲波法 | |
凍融法 | |
化學方式 | 異硫氰酸胍法 |
堿裂解法 | |
生物方式 | 酶法 |
根據核酸分離純化方式的不同有：
吸附材料結合法
| 硅質材料
| 高鹽低pH值結合核酸，低鹽高pH值洗脫。快捷高效。 |
陰離子交換樹脂 | 低鹽高pH值結合核酸，高鹽低pH值洗脫。適用于純度要求高的實驗。 | |
磁珠 | 磁性微粒掛上不同基團可吸附不同的目的物，從而達到分離目的。 | |
濃鹽法 | 利用RNP和DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離 | |
有機溶劑抽提法 | 有機溶劑作為蛋白變性劑，同時抑制核酸酶的降解作用 | |
密度梯度離心法 | 利用不同內容物密度不同的原理分離各種內容物 | |
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