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補體介導法細胞毒實驗

時間:2021/11/1閱讀:1655
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材料與儀器

C57BL/6J小鼠
Hank’s液 單克隆抗體 補體 伊紅-Y染液
眼科剪 眼科鑷 平皿 不銹鋼網 試管 吸量管 尖吸管 載玻片 蓋玻片 顯微鏡

實驗步驟


一、實驗方法
 
1.  小鼠胸腺細胞懸液的制備:將4~6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死,取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank’s液的平皿中,在100目的不銹鋼網上研磨后,過篩,放入試管,離心1 000 rpm,5分鐘,用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank’s液中,配成1×107/ml細胞懸液。
 
2.  取試管3支,標明順序,依據下表依次加入1×107/ml胸腺細胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank’s液,放入37℃水浴30分鐘。
 
3.  取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴,混勻,室溫放置2分鐘。
 
4.  重新混勻后分別在一張載玻片上滴片,加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀察,再用高倍鏡觀察,比較3管中細胞死活情況。
 
二、實驗結果
 
死細胞呈紅色,無光澤且腫脹變大;活細胞不著色、有光澤且形態正常。
 
高倍鏡下計數200個細胞并計算其中死細胞的百分數。計算公式如下:死細胞百分數= EQ EQ \F(實驗管死細胞數%-對照管死細胞數%,100%-對照管死細胞數%)



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