三级片视频播放,精品三级片在线观看,A级性爱视频,欧美+日韩+国产+无码+小说,亲子伦XX XX熟女,秋霞最新午夜伦伦A片黑狐,韩国理伦片漂亮的保拇,一边吃奶一边做边爱完整版,欧美放荡性护士videos

深圳市安培生物科技有限公司
中級會員 | 第5年

19126518388

血清系列
細胞轉(zhuǎn)染
支原體清除
細胞凍存
實驗耗材
分子試劑
細胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養(yǎng)基
ELISA試劑盒
TOYOBO(東洋紡)
ZYMO RESEARCH
Greiner(格瑞納)
IKA(艾卡)
化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細胞生物學(xué)
Corning康寧
解離試劑
細胞類-實驗耗材
原代細胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細胞系
生化試劑盒
環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
類器官培養(yǎng)
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質(zhì)
細胞因子分子
生物樣本庫
蛋白研究系列
修飾檢測試劑盒

從成年骨骼肌分離和培養(yǎng)成肌細胞的方法步驟

時間:2021/11/15閱讀:2061
分享:

材料與儀器

D-PBSA
轉(zhuǎn)運培養(yǎng)液 生長培養(yǎng)液 鏈酶菌蛋白酶液
尼龍網(wǎng) 手術(shù)刀 鋒利的長剪刀 Petri培養(yǎng)皿 培養(yǎng)瓶 20ml離心管或一般容器 血細胞計數(shù)板

步驟

一、分離

1. 用手術(shù)刀切除活檢組織塊上的非肌性組織,然后用 D-PBSA 浸洗。

2. 稱重前,與肌纖維平行將切除活檢組織切成片,用沖洗。

3. 將組織片平行放入 Petri 培養(yǎng)皿蓋內(nèi),切成較薄的柱狀組織塊,然后切成 1 mm3 小塊。不要擠壓組織。也可在試管內(nèi)用長剪刀將組織剪成小塊,應(yīng)避免擠壓組織。

4. 用 D-PBSA 浸洗組織塊,靜置后吸去上清液。

5. 在 37°C 條件下,用鏈酶菌蛋白酶液(0.15 % 鏈酶菌蛋白酶(Sigma P-6911)、0.03% EDTA(Merck 8418)、20 IU/ml 青霉素和 20 μg/ml 鏈霉素(0.4% Eurobio PES3000),用 Ham F12 或 D-PBSA 配制,100ml)消化組織塊 1 h。每 1~3 mg 組織塊用 15 ml 鏈酶菌蛋白酶液。每間隔 10~15 min 輕輕搖晃試管。

6. 孵育后用吸管研磨組織塊。由于越來越多的細胞分離下來,培養(yǎng)液會逐漸變得渾濁。

7. 讓組織塊沉到試管的底部,形成沉降的組織塊(P1 ) 和上清液(S1)。

8. 用孔徑為 100 μm 的尼龍網(wǎng)將 S1 濾入 20 ml 離心管。輕輕搖晃或用吸管吹打上清液,使細胞混懸。

9. 離心(350 g,8~10 min)后,吸去上清液。

10. 準(zhǔn)確加入 10 ml 生長培養(yǎng)液(Ham F12,添加 20 % FBS (Gibco 011-06290),200 ml),用帶有橡皮吸頭的吸管很輕微地混懸細胞。然后,用血細胞計數(shù)板計數(shù)細胞。

11. 用生長培養(yǎng)液稀釋細胞懸液,以約 1.5×104 個/ml 的細胞密度將細胞接種于培養(yǎng)瓶。從 1 g 健康供體活檢組織約獲得 1~2×105個細胞。

12. 將 15 ml 消化液加入 P1,在 37°C 水浴中孵育組織塊 30 min,并定時搖晃。

13. 用吸管吹打細胞懸液,使細胞分散。然后,用尼龍網(wǎng)過濾細胞懸液。用 20 ml 生長培養(yǎng)液浸洗濾網(wǎng)。

14. 離心(350 g,8~10 min)后,計數(shù)細胞,按上述方法接種細胞。

15. 將培養(yǎng)瓶移入濕潤的培養(yǎng)箱,在 37°C 和 5 % CO2 的條件下培養(yǎng)細胞。

二、維持培養(yǎng)

16. 接種后 24 h 很輕微地換培養(yǎng)液,以后每 3~4 d 換液 1 次。細胞主要向著分化生長。人成肌細胞的生長分 3 期,培養(yǎng)后 4~6 d 增殖達髙峰;8 d 左右排列成行;10~12 d 細胞融合和形成肌管增多。然而,必須記住一些細胞可能分化較早,絕大多數(shù)細胞分化時一些細胞仍處于增殖狀態(tài)。

三、傳代培養(yǎng)

17. 將少量 EDTA 輕輕注在細胞上面后立即吸去。

18. 加入 0.25 % 胰蛋白酶液,足以在細胞上面形成一薄層。

19. 當(dāng)細胞去附著時,加入 5~10 ml *生長培養(yǎng)液,用吸管很輕微地吹打細胞,然后離心(350 g,10 min)。

20. 計數(shù)細胞,按一定密度種植細胞。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 马山县| 双峰县| 蒲江县| 蓝田县| 安福县| 前郭尔| 威远县| 宝兴县| 万宁市| 桓台县| 察雅县| 维西| 峡江县| 肇庆市| 南华县| 霍州市| 舒兰市| 杭锦后旗| 泗洪县| 苍南县| 清徐县| 蓬溪县| 福清市| 屏东市| 泰宁县| 清新县| 巴彦淖尔市| 江山市| 乐山市| 金堂县| 清涧县| 盐池县| 平罗县| 都安| 砚山县| 麻城市| 石家庄市| 岑巩县| 灌南县| 马尔康县| 阿荣旗|