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人生長激素的放射免疫分析法

時間:2021/12/16閱讀:1436
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材料與儀器

hGH表達質(zhì)粒
洗滌液 親和素包被珠
試管 γ計數(shù)儀

步驟


1.  取轉(zhuǎn)染了hGH表達質(zhì)粒的哺乳動物細胞的培養(yǎng)液100~500 μl。

2.  加100 μl 培養(yǎng)液或標準品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-標記的抗體溶液,混合。加入1顆親和素包被珠,蓋上試管蓋或用Parafilm膜封口,室溫下在一水平旋轉(zhuǎn)器上以約170 r/min 搖動下溫育90 min。

3.  加2 ml 冼滌液洗磁珠兩次。*吸干洗滌液。
 
圖一、人生長激素表達載體
圖一、人生長激素表達載體
 
4.  將試管置于γ計數(shù)儀上計數(shù)1 min。
 
5.  用試劑盒中的hGH標準品測得的數(shù)據(jù)繪制標準曲線。用這個標準曲線來計算未知樣品的hGH含量。


同實驗其他方法

CAT活性的層析分析法

1.  100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達質(zhì)粒的貼壁細胞,用PBS洗兩次,每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細胞置于冰浴5 min。   2.  用橡膠

原位裂解細胞的CAT分析法

1.  60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達質(zhì)粒的細胞,用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液,在室溫下溫育2~5 min。 2.  吸去低滲緩沖液,加入400 μl T

CAT活性的相-抽提分析法

一、來源于哺乳動物細胞 1.  按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法,制備哺乳動物細胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細胞方法來收集細胞,則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2

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