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原代細胞培養實驗注意事項詳解

時間:2022/1/6閱讀:2509
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(1)原代培養材料的選擇,盡量選取繁殖能力較強的組織,如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等。


(2)要注意無菌操作。其操作要求應高于外科手術


(3)整個取材操作要迅速,尤其孕鼠浸泡乙醇時間1min左右,不能過長,以確保胚胎細胞活性。


(4)運用消化法時胰酶溫度應低于37℃,濃度只需平時消化細胞濃度的一半。因為此過程不像消化培養細胞時的1~10min,而是至少20min,先消化下來的細胞在此胰酶消化液中繼續消化了10min以上。所以胰酶不能作用過強,否則這些細胞易被損傷而不易生存。


(5)如使用組織塊法,則應待組織塊略干燥,能黏附于瓶壁時再使之與培養液接觸,匆使組織塊漂浮起來。如果組織塊沒有黏壁,則細胞不易生長,即使生長也因沒有貼在瓶壁上,從而因不能觀察到而無法收集到生長的細胞。


(6)原代培養操作時,也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等。


(7)本實驗也可以使用新生乳鼠做培養材料。此時要將乳鼠浸入75%乙醇2~3min使皮膚充分消毒,由于乳鼠原代培養污染概率更高,故應小心操作,避免污染細菌。乳鼠原代培養細胞的存活率不及胚胎細胞培養的成功率。


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