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Biozellen植物源基質(zhì)膠在內(nèi)皮細胞血管生成實驗的操作應(yīng)用

時間:2022/4/11閱讀:1796
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Biozellen植物源基質(zhì)膠在內(nèi)皮細胞血管生成實驗的操作應(yīng)用

內(nèi)皮細胞血管生成實驗步驟

A、試驗材料準備:

1、內(nèi)皮細胞:臍帶內(nèi)皮細胞(實驗使用細胞代數(shù)需低于五代)

2、內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液(含內(nèi)皮生長所需因子): 自己配置 or 采購市售專用內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液 (如購自Lonza或者Promocell等品牌)

3、生長因子:VEGF,Heparin等(如購自Sigma)

B、膠體制備試劑準備:

1、A膠(1X)制備:將 A膠 (2X) 置于37℃水浴槽回溫10分鐘,確認*溶解。A膠(2X)與含有生長因子(例如VEGF等)的內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液,按照1:1比例混合均勻。(例如:將37℃水浴回溫的內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液取 0.5mL,直接加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A膠 (2X),配置成 1 mL 的 A膠 (1X)。使用前置于37 ℃,可降低黏度。建議單次使用,勿重復冷凍解凍 A膠 (1X) )

2、A膠 (0.5X) 制備:將上述步驟1的 A膠 (1X)與含有生長因子的內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液,按照1:1比例混合均勻。

3、C緩沖溶液 (5 X) 制備 : C緩沖溶液 (10 X) 與預(yù)冷的含有生長因子的內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液,按照 1:1 比例混合均勻。(例如 : 0.5 mL C緩沖溶液 (10 X) + 0.5 mL 含有生長因子的內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液)

C、內(nèi)皮小管生成實驗準備程序:

1、 96 孔細胞培養(yǎng)板放置于冰上。

2、加入 50 μl A膠 (0.5X) 平鋪到96孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)。

3、將步驟 2 的培養(yǎng)板置于冰上 10 分鐘。

4、加入 100 μl 冰的C緩沖溶液(5 X),蓋過步驟3的A膠,在冰上反應(yīng)15分鐘.(C緩沖溶液用于A膠凝膠反應(yīng))

5、待反應(yīng)15分鐘后,小心的吸出 C 緩沖溶液。

6、加入100μl含有生長因子5 μg/ml VEGF及0.25 mM Heparin之內(nèi)皮細胞懸浮液,使每孔細胞數(shù)目為2.5x10^4 cells/well (細胞濃度為2.5 x 105 cells/mL)。

6.1、():建議添加VEGF及Heparin方式如下,取1 mL細胞濃度2.5 x 105 cells/mL的內(nèi)皮細胞懸浮液進行離心,并收集細胞沉淀。 細胞沉淀物先與0.125 mL的40 μg/ml VEGF及0.125 mL,2 mM Heparin 進行混合5-10分鐘。最后再加入0.75 mL細胞培養(yǎng)液,使VEGF最終濃度為5 μg/ml、Heparin最終濃度為0.25 mM及細胞濃度為2.5 x 105 cells/mL。

7、將細胞培養(yǎng)板在37 ℃, 5 % CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)12小時內(nèi)完成。(建議內(nèi)皮細胞觀察時間為6-8小時)

在內(nèi)皮細胞血管生成實驗的應(yīng)用編輯


在內(nèi)皮細胞血管生成實驗中所用到的基質(zhì)膠產(chǎn)品信息:

美國Biozellen植物源基質(zhì)膠(貨號B-P-00002系列)編輯

產(chǎn)品描述Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝包含整套基質(zhì)膠、膠體固定液、膠體溶解液,可應(yīng)用到 3D 細胞培養(yǎng)與微環(huán)境應(yīng)用等;本試劑盒操作便利且可調(diào)控基質(zhì)膠硬度進行多種細胞培養(yǎng)測試等;膠體可快速被固定液分解。(Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝為植物來源,無動物源成分、不含酚紅)

貨號: B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

規(guī)格: 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

保存條件:4℃保存、 保存兩年

 

安培生物科技有限公司是美國Biozellen公司的中國代理商。Biozellen®3D細胞/類器官培養(yǎng)基質(zhì)膠現(xiàn)貨供應(yīng),經(jīng)驗證可*替代BD/康寧的基質(zhì)膠,來源為植物源且氨基酸序列人源化,無人畜共患病的病原菌或毒素污染,提供完整售后服務(wù)和技術(shù)支持。



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安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。



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