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配制培養基時,葡萄糖和谷氨酰氨的使用

時間:2023/1/3閱讀:3907
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    葡萄糖在生物學領域具有重要地位,是活細胞的能量來源和新陳代謝中間產物,為生物的主要供能物質,所以在培養細胞中,一般的細胞都會選擇高糖的培養基來促進細胞體外生長。

 

    在目前常用的培養基中,葡萄糖和谷胺酰胺是體外培養動物細胞的主要能源,其能量代謝通路與體內完-全不同,表現為葡萄糖主要經糖酵解途徑為細胞提供能量,谷胺酰胺大部分通過不完-全氧化途徑,另一小部分通過完-全氧化為細胞供能。因此,他們能調整細胞內的代謝途徑,促進細胞的快速生長和產物合成,同時減少代謝抑制物的生成。

    L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,它的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完-全降解。


    葡萄糖主要通過糖酵解和檸檬酸循環兩個酶系結構共同分解葡萄糖提供生理活動所需要的能量和細胞結構組成的小分子,并且能夠在組織細胞內起到維持滲透壓的作用,如果葡萄糖過多,那么會通過不同過程變成脂肪或蛋白質。



葡萄糖和L-谷氨酰胺在培養基中濃度

圖片

圖片


    谷氨酰胺在細胞代謝過程中起重要作用,合成培養基中都要添加,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定容易降解,4℃下放置7天即可分解約50%,所以都是在使用前添加。配制好的培養液(含谷氨酰胺)在4℃放置2周以上時,要重新加入原來量的谷氨酰胺,故需單獨配制谷氨酰胺,以便臨時加入培養液內。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L。一般配制為100倍濃縮液,即濃度為200mmol/L29.22g/L),配制時應加溫30℃,完-全溶解后過濾除菌,分裝至小瓶,儲存于-20℃。使用時,在每100ml培養液中加入0.5~2ml谷氨酰胺濃縮液,終濃度為1~4mmol/L即可。


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