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中壓層析柱的操作步驟
閱讀：1821 發布時間：2023-3-14
中壓層析柱是利用生物分子間所具有純化技術，它是利用生物分子間存在的特異性相互作用，通過將具有親和力的兩個分子中的一個固定在不溶性基質上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。
中壓層析柱的操作步驟：
1 準 備
在裝柱前，建議采用靜置沉淀法，確定膠懸液濃度，我們的填料是以50%的濃度儲存在20%的乙醇中。
2 檢 查
裝柱需借助裝柱系統完成，所有的組件必須處于完好的狀態，檢查玻璃部件，特別注意端部，應更換末端有缺口的柱子。
3 清 洗
柱子和裝柱器在使用前，應用20%乙醇潤洗，檢查篩板，確保所選篩板的孔徑和所選填料的粒徑相匹配，確保底端部件和頂部適配器的管件連接牢固。
4 安 裝
1) 柱子用柱夾或鐵架臺固定，確保柱管沒有傾斜，垂直于地面，避免裝好的柱子出現寬泛而彎曲的條帶。
2)向柱中加入蒸餾水或20%乙醇至幾厘米的高度，利用重力作用讓柱中液體從底端管線中流出，排出氣泡，在柱底預留至少1厘米高度的液體，并用堵頭連接管線的錐形接頭。
3)再次混勻膠懸液，確保懸液均一，借助玻璃棒將膠懸液盡可能一次性貼壁倒入柱管中，用裝柱緩沖液加滿柱管。
4)將適配器管線連接注射器，排出適配器管線中的氣泡。逆時針旋轉調節帽將固定帽、調節帽旋轉至調節桿最底端。
5)打開底部管線堵頭，將適配器垂直放在玻璃管上，順時針擰緊固定帽，請確保整個操作在一條直線上完成。注意不要引入氣泡。
6)按照填料說明書推薦的流速運行設備，不同的填料推薦的裝柱流速不同，很多填料會需要分2個階段進行裝柱，第一步用推薦流速加快沉降，第二步用更高的流速(不超過推薦流速的30%)壓實填料，請在流速開啟前閱讀填料說明書。繼續運行至膠面穩定，讀取刻度并記錄。
7)停止設備流速，將適配器順時針向下擰至讀取刻度下2~3mm，繼續運行流速，如果膠面發生改變，可以重新調節適配器高度。裝柱完成。