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前言

在國家藥典委修訂的2025年版《中國藥典》標準草案中，黃芪和檳榔標準草案中增訂了赭曲霉毒素A的檢查項。在修訂草案的公示稿中對于供試品的制備，與2020年版《中國藥典》2351赭曲霉毒素A測定法中供試品溶液的制備有較大差異，差異如下：

本次實驗參考了2025年版《中國藥典》黃芪和檳榔的修訂草案公示稿，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測器進行檢測。實驗結果顯示，理論塔板數以赭曲霉毒素A峰算遠高于藥典要求4000，目標峰周圍無雜峰，滿足系統適用性試驗要求。對照品赭曲霉毒素A保留時間重復性RSD為0.075%，峰面積重復性為0.421%，重復性較好。曲線測試R值在0.999以上。赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。以上數據均滿足藥典方法的要求。

關鍵詞：黃芪；檳榔；高效液相色譜法；熒光檢測器；赭曲霉毒素A。

1 實驗方法

1.1 儀器配置

1.２實驗材料及輔助設備

乙腈：色譜純；

甲醇：色譜純；

冰乙酸：優級純；

赭曲霉毒素A標準品：100mg/L；

聚山梨酯20：分析純；

氯化鈉：優級純；

磷酸氫二鈉：優級純；

磷酸二氫鉀：優級純；

氯化鉀：優級純；

鹽酸：優級純；

赭曲霉毒素A免疫親和柱；

離心機。

1.3測試條件

1.4溶液配制

1.4.1 PBS緩沖液

稱取氯化鈉8.0g、磷酸氫二鈉1.2g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鉀0.2g，加水990mL使溶解，用鹽酸調節pH值至7.0，加水稀釋至1000mL，即得。

1.4.2 聚山梨酯20 PBS緩沖液

取聚山梨酯20 1.0mL，加PBS緩沖液稀釋至1000mL，即得。

1.4.3對照品溶液

精密量取赭曲霉毒素A對照品適量，用甲醇制成濃度為每1mL含2.5ng的溶液，即得。

1.4.4供試品溶液的制備  

取供試品粉末約3g，精密稱定，置于均質瓶中，加入氯化鈉3g，精密加入70%甲醇60mL，離心10分鐘（離心速度8000r/min），精密量取上清液5mL，置于50mL量瓶中，用PBS緩沖液稀釋至刻度，搖勻，離心15分鐘（離心速度8000r/min），精密量取上清液20mL，通過免疫親和柱，流速每分鐘3mL，用聚山梨酯20 PBS緩沖液10mL沖洗，棄去洗脫液，使空氣進入柱子，再用水10mL洗脫，流速每分鐘6mL，棄去洗脫液，使空氣進入柱子，將水擠出柱子，再用甲醇1.5mL洗脫，收集洗脫液，置2mL量瓶中，并用水稀釋至刻度。

２ 結果與討論

２.1 系統適用性

說明：由上述譜圖可見，理論塔板數以赭曲霉毒素A峰算遠高于藥典要求4000，目標峰周圍無雜峰，滿足系統適用性試驗要求。

２.２ 對照品重復性測試

說明：由上表數據可知，赭曲霉毒素A保留時間重復性RSD為0.075%，峰面積重復性為0.421%，重復性較好，滿足實驗要求。

2.3 曲線測試

說明：赭曲霉毒素A對照品濃度為2.5μg/L，分別進樣5μL，10μL，15μL，20μL，25μL。由上圖數據可知，曲線方程R值為0.999以上，滿足實驗要求。

2.4 檢出限測試

說明：由上表數據可知，赭曲霉毒素A濃度為2.5μg/L，進樣量5μL，可得進樣質量為12.5ng。由三倍信噪比為檢出限可得赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。滿足實驗要求。

2.5 黃芪和檳榔測試結果

說明：由黃芪加標譜圖中可以表明，黃芪譜圖中的峰不是赭曲霉毒素A，黃芪和檳榔中未檢測出赭曲霉毒素A，且在空白實驗及空白前處理實驗也未檢測出未知峰，黃芪和檳榔譜圖中的未知峰應是樣品中未知物。

2.6 注意事項

1. 免疫親和柱需在2-8℃冰箱中保存，不可冷凍；

2. 赭曲霉毒素A標準品需在-20±5℃下保存。

３ 結論

本次實驗參考了2025年版《中國藥典》黃芪和檳榔的修訂草案公示稿，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測器進行檢測。實驗結果顯示，理論塔板數以赭曲霉毒素A峰算遠高于藥典要求4000，目標峰周圍無雜峰，滿足系統適用性試驗要求。對照品赭曲霉毒素A保留時間重復性RSD為0.075%，峰面積重復性為0.421%，重復性較好。曲線測試R值在0.999以上。赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。以上數據均滿足藥典方法的要求。