水土中總磷酸鹽試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
總磷酸鹽包含正磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、多聚磷酸鹽等各種磷酸鹽的形式，反應了水土中的磷酸鹽水平，是一個水質(zhì)和土壤質(zhì)量評價的重要指標。
測定原理：
在酸性溶液中，在分解劑和高溫條件下，將無機磷酸鹽和有機磷酸鹽水解成正磷酸鹽，正磷酸鹽可與鉬酸銨反應成磷鉬酸，在還原劑存在時被還原為磷鉬藍，在710nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
天平，震蕩儀、常溫離心機、酶標儀、96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體40mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體4mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加4mL蒸餾水充分溶解，然后將試劑五全部加入試 劑四中充分混勻。
試劑五：液體×1支，4℃保存。
樣品處理：
1. 水樣：按照水樣體積（mL）：試劑一體積（mL）：試劑二體積（mL）為10:1:2的比例（建議取1mL水樣，加入100μL試劑一和200μL試劑二）95℃沸水浴30min，冷卻后待測。
2. 土樣：按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)：試劑一體積（V）：試劑二體積（V）=1：10:1:2（建議稱取約0.1g土樣，加入1mL蒸餾水，再加入100μL試劑一和200μL試劑二），95℃沸水浴振蕩30min，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測。
測定操作表：
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 40 | |
試劑三（μL） | 40 | 40 |
試劑四（μL） | 40 | 40 |
蒸餾水（μL） | 120 | 80 |
充分混勻，25℃靜置10min，于96孔板測定710處吸光值A，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管 | ||
計算公式：
標準曲線：y = 0.0237x + 0.0016，R2 = 0.9989；x為PO4-濃度μg/mL，y為吸光值△A。
1. 水樣：
總磷酸鹽含量（μg/mL）= (△A-0.0016)÷ 0.0237×V樣÷（V樣÷V樣總）
= 54.8×(△A-0.0016)
2. 土樣：
總磷酸鹽含量（μg/g）= (△A+0.0063)÷ 0.0489×V樣÷（W×V樣÷V樣總）
=54.8×(△A+0.0063)÷W
V樣：加入樣本體積；0.04mL；V樣總：樣本總體積，1.3mL；W，土樣質(zhì)量，g。
注意事項：
1. 配制的試劑四一周內(nèi)使用完。
2. 檢出限為65μg/mL或65μg/g。
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