土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性測定試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動物和某些細菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代謝中具有重要調控作用，尤其是調節游離氨含量和尿素代謝。
測定原理：
S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏試劑檢測氨增加的速率，即可計算其酶活性。
需自備儀器和用品：
臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽、甲苯、冰和雙蒸水。
試劑組成和配制：
試劑一×1瓶，15 mL，4 ℃保存；
試劑二×1瓶，40 mL，4 ℃保存；
試劑三×1瓶，60 mL，常溫保存；
試劑四×1瓶，5 mL，常溫保存；
試劑五×1瓶，3 mL，常溫保存；
試劑六×1瓶，3 mL，常溫避光保存。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至420nm，蒸餾水調零。
2、樣品測定（在EP管中加入下列試劑）：
試劑名稱（uL） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 0.1 | |
甲苯 | 25 | 25 |
振蕩混勻，室溫放置15min | ||
試劑一 | 100 | 100 |
試劑二 | 400 | 400 |
混勻，37℃水浴2 小時
試劑三 | 525 | 525 |
混勻，8000 g，25℃離心10 min；取上清液，依次加入下列試劑
上清液 | 130 | 130 |
試劑四 | 30 | 30 |
試劑五 | 20 | 20 |
試劑六 | 20 | 20 |
混勻，室溫靜置15min，420nm處讀取測定管和對照管吸光值，
計算ΔA=A測定管-A對照管。對照管只要做一管。
注意：試劑六如出現沉淀，靜置后取上清使用。
酶活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 3.8488x+0.0057；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值A。
單位定義：每g土樣每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。
S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反總÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。
V反總：反應體系總體積：1.05mL；T：反應時間，2h=120min；W：樣本質量，g; 1000，μmol到nmol換算系數。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 1.9244x+0.0057；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值A。
單位定義：每g土樣每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。
S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反總÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。
V反總：反應體系總體積：0.525mL；T：反應時間，2h=120min；W：樣本質量，g; 1000，μmol到nmol換算系數。
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