丙二醛(MDA)含量檢測試劑盒

微量法

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

規格：100T/96S

產品內容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存；

MDA 檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二中加入 15mL 試劑一，溶解混勻，4℃保存待用。試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；

注意事項：MDA 檢測工作液較難溶解，可以 70℃加熱，并劇烈振蕩以促進溶解。或者通過超聲處理以促進溶解。

產品說明：

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物， 其中包括丙二醛 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。

丙二醛（MDA）在酸性和高溫條件下，可以與硫代巴比-妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成棕紅色的三甲川（3,5,5-三甲基惡唑-2，4-二-酮），其最大吸收波長在 532nm。進行比色后可估測 樣品中過氧化脂質的含量。但是測定植物組織中 MDA 時受多種物質的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與 TBA 顯色反應產物的最大吸收波長在 450nm，但 532nm 處也有吸收。所以同時測定 600nm、

532nm、450nm 下的吸光度，利用 532nm 與 450nm、600nm 下的吸光度的差值計算 MDA 的含量。由于植物中受蔗糖干擾較大，動物中受葡萄糖干擾較大，所以本試劑盒有針對蔗糖和葡萄糖的

兩個公式。若所測樣品為油脂類物質，則兩個公式均可。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、MDA 提取：

1、細菌或細胞樣品的制備：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 400 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 組織樣品的制備：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟：

1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上，蒸餾水調零。

2、按下表步驟加樣：

混合液在 100℃水浴中保溫 30min 后（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，常溫， 離心 10min。吸取 200uL 上清液于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，測定各樣品在 450nm、532nm 和

600nm 處的吸光度。三、MDA 含量計算：

a. 按 96 孔板計算

1、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算

（1） 按照蛋白濃度計算

MDA 含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）×V 總÷（Cpr×V 樣本）

=5×（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）÷Cpr

（2） 按照樣品質量計算

MDA 含量（nmol/ g 鮮重）=（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）×V 總÷（W×V 樣本÷V 提取）

=5×（12.9×（A532 -A600）-2.58×A450）÷W

(3) 按照細菌或細胞密度計算：

MDA 含量（nmol/104 cell）=（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）×V 總÷（400÷V 提取×V 樣本）

=0.125×（12.9×（A532-A600）-2.58×A450）

V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。

W：樣品質量，g；400：細胞或細菌總數，400 萬；V 提取：提取液體積，1mL。

2、植物組織中 MDA 含量計算

（1）按照樣品質量計算

MDA 含量（nmol/ g 鮮重）=（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）×V 總÷（W×V 樣本÷V 提取）

=5×（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）÷W

（2）按照蛋白濃度計算

MDA 含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）×V 總÷（Cpr×V 樣本）

=5×（12.9×（A532-A600）-1.12×A450）÷Cpr

V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。

W：樣品質量，g；V 提取：提取液體積，1mL。

b. 按微量比色皿計算

1、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算

（1） 按照蛋白濃度計算

MDA 含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）×V 總÷（Cpr×V 樣本）

=5×（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）÷Cpr

（2） 按照樣品質量計算

MDA 含量（nmol/ g 鮮重）=（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）×V 總÷（W×V 樣本÷V 提取）

=5×（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）÷W

(3) 按照細菌或細胞密度計算：

MDA 含量（nmol/104 cell）=（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）×V 總÷（400×V 樣本÷V 提取）

=0.125×（6.45 ×（A532-A600）-1.29×A450）

V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。

W：樣品質量，g；400：細胞或細菌總數，400 萬；V 提取：提取液體積，1mL。

2、植物組織中 MDA 含量計算

（1）按照樣品質量計算

MDA 含量（nmol/ g 鮮重）=（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）×V 總÷（W×V 樣本÷V 提取）

=5×（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）÷W

（2）按照蛋白濃度計算

MDA 含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）×V 總÷（Cpr×V 樣本）

=5×（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）÷Cpr

V 總：反應體系總體積，0.5mL；V 樣品：加入樣品體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。

W：樣品質量，g；V 提取：提取液體積，1mL。