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HPLC固定相：疏水性相互作用固定相
閱讀：1571 發布時間：2016-1-20
疏水性相互作用色譜（HIC）是為了適應活性生物大分子，特別是蛋白質的分離而發展起來的一種液相色譜方法。
分離機理與反相色譜的強疏水性作為類型，但是其分離機制更多地依賴于溶質與填料表面之間弱的疏水性相互作用。HIC柱填料的表面具有弱疏水性特征，在高離子強度流動相條件下，蛋白質分子中的疏水性部分與填料表面產生疏水性相互作用而被吸附，當流動相的離子強度逐漸降低時，蛋白樣品則按其疏水性特征被依次洗脫，疏水性越強，洗脫的時間越長，進而實現分離。與反相色譜比較，HIC方法避免了流動相中使用大量有機溶劑，能有效的保持被分離物質的生物活性，因此在生化樣品的分離純化方面被廣泛采用。
常見的商品鍵合相HIC填料基質材料包括硅膠和高聚物兩種。高聚物基質包括多糖型凝膠和合成高聚物微球等。
為了提高基質表面的疏水性，可以采用鍵合羥丙基、甲基、丙基、丁基、苯基、戊基、苯甲基等段煉烷烴的方法，也可以在硅膠上先鍵合上環氧丙氧基三乙氧基硅烷，再在路易斯酸催化下接上短鏈烷氧基制成醚型鍵合相；將聚乙二醇與環氧化硅膠反相，則可制備出聚乙二醇型HIC填料。