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液相色譜法檢測人血漿甲氨蝶呤的濃度HPLC
閱讀：1190 發布時間：2016-6-16
甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）是二氫葉酸還原酶抑制劑，是通過抑制細胞內二氫葉酸酶達到殺滅腫瘤細胞的作用。目前臨床采用大劑量甲氨蝶呤配合亞葉酸鈣解救（HD-MTX+CF）治療急性淋巴細胞白血病（ALL）。有研究表明，ALL患者MTX血藥濃度與不良反應和療效之間存在密切關系且個體差異大。
為了安全有效地實施HD-MTX給藥，監測MTX用藥后的血藥濃度尤為必要，以確保臨床用藥安全有效。目前測定MTX血藥濃度的方法有熒光偏振免疫分析法、液相色譜法（HPLC）、LC-MS法等。熒光偏振免疫分析法成本昂貴，且專一性差，難以推廣，而且由于代謝產物的存在抗體可能交叉反應使測定結果偏高。國外采用LC-MS法測定MTX血藥濃度雖專一性較強且靈敏度高，但此方法費用高，操作復雜。而HPLC具有專屬性高、靈敏、準確、適用性強等優點，更適合廣泛應用。
檢測儀器：液相色譜儀（色譜工作站，SPDiOA—VP紫外檢測器）；旋渦混合器；臺式離心機。
色譜條件：色譜柱柱溫為35℃；檢測波長為303nm：流動相為乙腈-0．16mol/L乙酸鈉水溶液（12∶88）；流速1ml/min。
測定方法
對照品溶液制備：精密稱取MTX對照品1．5mg置50ml容量瓶中加甲醇溶解并定容至刻度，得30．0μg/ml的對照品儲存液，置于4℃冰箱保存。使用時精密吸取適量對照品儲存液加人血漿稀釋至所需濃度。
血漿樣品預處理：取樣品血漿200μl，置于1．5mlEP塑料管中，加入50μl6％高氯酸液，沉淀血漿中的蛋白質，旋渦振搖2min，于4000r/min離心5min。
取20μl上清液進樣，記錄色譜圖。