本說明書以DNA轉染為例進行說明：
第0天：細胞接種
→根據(jù)下表在V mL細胞生長培養(yǎng)基中接種細胞
培養(yǎng)皿 | 細胞數(shù)量 | V=轉染過程中培養(yǎng)基的體積 |
96孔 | 7500 - 25000 | 0.125 mL |
24孔 | 40000 - 100000 | 0.5 mL |
12孔 | 80000 - 200000 | 1 mL |
6孔/35mm | 150000 - 400000 | 2 mL |
60mm/25cm2燒瓶 | 200000 - 850000 | 5 mL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1 x 106 - 4 x 106 | 10 mL |
*備注：對于特定的細胞類型或懸浮細胞，請參考完整的方案。
第1天：使用jetOPTIMUS®試劑進行轉染
→僅使用jetOPTMUS®緩沖液
→以60-80%融合率轉染細胞
培養(yǎng)皿 | W=jetOPTIMUS®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetOPTIMUS®體積 |
96孔 | 12.5 µL | 0.13 µg | 0.13-0.19 µL |
24孔 | 50 µL | 0.5 µg | 0.5-0.75 µL |
12孔 | 100 µl | 1 µg | 1-1.5 µL |
6孔/35mm | 200 µl | 2 µg | 2-3 µL |
60mm/25cm2燒瓶 | 500 µl | 4 µg | 4-6 µL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1000 µl | 10 µg | 10-15 µL |
第2-3天：測量基因表達
protocol優(yōu)化：
（1）測試不同的DNA量：X、0.5 X和1.5 X。
（2）測試不同的DNA/jetOPTIMUS®比例，1:1至1:1.5。
（3）有關細胞特異性協(xié)議，請聯(lián)系益元利康客服獲取。
培養(yǎng)皿 | W=jetOPTIMUS®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetOPTIMUS®體積 |
96孔 | 12.5 µL | 0.10-0.20 µg | 0.10-0.30 µL |
24孔 | 50 µL | 0.25-0.75 µg | 0.25-1 µL |
12孔 | 100 µl | 0.5-1.5 µg | 0.5-2.25 µL |
6孔/35mm | 200 µl | 1-3 µg | 1-4.5 µL |
60mm/25cm2燒瓶 | 500 µl | 2-6 µg | 2-9 µL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1000 µl | 5-15 µg | 5-22 µL |
提高敏感細胞細胞活力的提示：
（1）轉染后4小時更換培養(yǎng)基。
（2）將DNA量減少到0.5倍，同時保持之前使用的DNA/jetOPTIMUS®比例。
（3）在較早的時間點（例如轉染后24小時而不是48小時）分析轉染。
（4）在敏感細胞的還原血清培養(yǎng)基中進行轉染。
（5）檢查靶基因是否影響細胞活力。
（6）確保細胞在轉染前已傳代兩次以上且少于20次。
（7）丟棄過度培養(yǎng)的細胞。
良好的DNA轉染實踐：
（1）適當儲存jetOPTIMUS®（5±3°C）。
（2）定期檢查支原體污染情況。
（3）使用報告基因來建立和優(yōu)化轉染條件。
（4）血清質量可能嚴重影響轉染效率。購買新一批血清時或胰蛋白酶檢查細胞活力以及轉染效率。
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polyplus轉染試劑jetOPTIMUS®產品說明書提供商——天津益元利康生物科技有限公司成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)。公司產品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子
生物學、細胞生物學等多個方向，專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產品銷售，經(jīng)營的品牌主要有：ThermoFisher、
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