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關于elisa實驗問題的解決方法及建議

時間:2022/6/28閱讀:866
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  由于實驗過分嚴謹,出現一些可控亦或不可控的因素,會對于實驗造成一些影響,也會導致一些問題的出現。對于實驗中可能出現的一些情況或者問題,我司有一些小小的建議及方案:


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1. 加入反應終止液后,沒有吸光值或吸光值偏低?

原因:未加入酶標記物。

解決辦法:請按照操作步驟進行。

原因:試劑盒內容物未能充分回。

解決辦法:確定試劑盒內容物回溫后再進行操作。

原因:室溫太低。

解決辦法:若室溫太低(<19),請于操作步驟4,適當延長溫育時間。

原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法: 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。

原因:試劑盒已過有效期限。

解決辦法:請更換成仍在有效期限內的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳,或是平行性不好?

原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法: 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)

原因:操作時間拖太久。

解決辦法:請在方法熟練后再進行操作。

原因:微孔間相互污染。

解決辦法: 加樣品時,請小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

原因:標準品或酶標記物所加入的量不一致。

解決辦法:請使用已校正過的移液槍,并確保其與吸頭之間有高度密合性。

原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法:加樣品或試劑時,吸頭請勿接觸微孔。

原因:洗板過程發生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)

解決辦法:請隨時監控洗板機洗板過程,洗完后立即進行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)?

原因:室溫太高(>25)

解決辦法: 若無法降低室內溫度,請適當縮短步驟4的溫育時間。

原因:底物溶液受到污染。

解決辦法: 若發現底物溶液已呈現淡藍色,請不要再使用。

原因:反應時間超過太久。

解決辦法:請控制反應時間。

原因:酶標記物污染了盒內其它試劑。

解決辦法:使用過的吸頭應立即丟棄,可避免試劑間相互污染,凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡,再以清水沖洗干凈,可確保無殘留)

4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

原因:微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法: 試劑加完后,需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

原因:洗板過程發生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟.)

解決辦法:請隨時監控洗板機洗板過程,洗完后立即進行下一步驟。

原因:添加樣品或酶標記物的量不一致。

解決辦法: 請使用已校正過的移液槍,并確保其與吸頭之間有高度密合性。


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