酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA)是Engvall和Van weemen于1971年提出的。該法是以固相載體吸附技術(shù)和免疫酶技術(shù)相結(jié)合建立的一種檢測(cè)方法，其操作簡(jiǎn)便，無(wú)需特殊設(shè)備，并具有高度的敏感性和準(zhǔn)確性，所以受到大家的廣泛重視，以致在較短時(shí)間內(nèi)，于國(guó)內(nèi)外均取得了較快的進(jìn)展。

(一) 主要的技術(shù)類型 ELISA的技術(shù)類型很多，但以檢測(cè)抗體的間接法，及測(cè)定抗原的雙抗體夾心法最chang用，現(xiàn)將其操作流程分別簡(jiǎn)介如下。

1. 間接法首先將已知標(biāo)準(zhǔn)抗原吸附在聚苯乙烯塑料反應(yīng)板的相應(yīng)孔中，然后加入被檢血清，在溫箱中作用一定時(shí)間，使形成的抗原抗體復(fù)合物均勻地附著在固相載體上，再滴加用辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗免疫球蛋白，則與固相載體上的抗原抗體復(fù)合物的抗體結(jié)合，當(dāng)加入底物溶液時(shí)，H2O2在酶的催化下氧化，同時(shí)使無(wú)色的顯色劑鄰苯二胺(OPD)脫氫氧化，形成可溶性的氧化型棕色聯(lián)苯胺，產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度的差別，可用肉眼或特制的72型分光光度計(jì)檢測(cè)，由此推算出被檢血清中是否有相應(yīng)抗體，以及含量的多少。

2. 雙抗體夾心法首先將已知抗體球蛋白吸附在載體上，致敏后，沖洗除去多余抗體，滴加被測(cè)抗原，致敏后，沖去過剩抗原，滴加酶標(biāo)抗體，室溫下致敏后，沖洗除去過剩的標(biāo)記抗體，加入底物溶液顯色后，再加入終止劑，以終止反應(yīng)的進(jìn)行，最后根據(jù)反應(yīng)孔中顏色的深淺，對(duì)被檢抗原作出檢定。

(二) 在微生物檢測(cè)方面的應(yīng)用   ELISA技術(shù)問世以來(lái)，已廣泛用于各種病原微生物，如病毒、細(xì)菌、真菌、支原體、立克次氏體、衣原體、螺旋體等及其抗體的檢測(cè)，在微生物檢測(cè)和疾病診斷方面發(fā)揮了重要作用，通過試劑和檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化，組裝的ELISA診斷試劑盒，已在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用。

(三) ELISA的特點(diǎn) 靈敏度高，檢測(cè)能力可達(dá)10-6mg/ml水平；應(yīng)用范圍廣，既能檢測(cè)抗原又能檢測(cè)抗體，既能定性又能定量；有效期長(zhǎng)，酶標(biāo)抗體于普通冰箱中可保存一年以上，效價(jià)不下降，制成的標(biāo)本，可長(zhǎng)久保存，供隨時(shí)復(fù)查用。

［附］： 免疫酶染色法(組化法) 該法的原理與免疫熒光法相似，不同之處在于用酶標(biāo)記的抗體，稱酶標(biāo)抗體。酶標(biāo)抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，當(dāng)加入酶的底物時(shí)，底物在酶的催化下，發(fā)生組織化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)不需特殊儀器，在光學(xué)顯微鏡下即能觀察，目前常用的酶是HRP，底物為DAB，可生成棕褐色沉淀物，使玻片組織標(biāo)本上的抗原所在部位呈現(xiàn)顏色。