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線粒體作為細胞的“能量工廠",其功能高度依賴線粒體DNA(mtDNA)的完整性。mtDNA拷貝數(每個細胞中mtDNA的分子數)不僅是評估線粒體功能的金標準,更與衰老、代謝紊亂、神經退行性疾病及癌癥的發生發展密切相關。隨著精準醫學的興起,mtDNA拷貝數檢測技術已成為疾病診斷、機制研究和藥物開發的核心工具。
試劑盒巧妙運用雙色熒光 TaqMan 探針法定量 PCR 技術。
細胞內線粒體檢測時,FAM 熒光精準追蹤線粒體拷貝數,HEX熒光同步記錄細胞數目,二者協同,依托標準曲線,勾勒出線粒體在細胞內的真實分布圖。
而游離線粒體檢測,FAM 熒光專注計算線粒體拷貝數,HEX熒光則化身質檢員,對游離基因組 DNA 抽提質量嚴格把關,確保檢測結果的可靠性。
基于實時熒光定量PCR(qPCR)的檢測方案,通過以下創新實現了技術躍升:
1) 特異性探針設計:針對mtDNA保守區域設計引物與探針,避免核基因組DNA干擾,特異性高達99.9%。
2) 雙標準曲線校準:引入梯度稀釋的標準品和校正品,構建動態范圍覆蓋1~10^6拷貝的定量曲線,檢測下限低至1拷貝/μL。
3) 自動化數據分析:結合AI算法優化閾值循環(Ct值)判定,減少人為誤差,提升重復性(CV值<5%)。
在細胞內線粒體拷貝數檢測的科研戰場上,清晰描繪出線粒體拷貝數隨年齡增長的變化軌跡,為衰老機制研究提供關鍵證據。
而在游離線粒體領域,通過嚴謹的 spearman 相關系數分析,試劑盒精準揭示出游離線粒體與年齡、性別的微妙關系,為相關研究提供了重要參考,助力科研人員深入探究線粒體在不同生理狀態下的奧秘。
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