1. 范圍
本方法采用液相色譜法檢測尿樣中利尿劑類藥物。
本方法適用于尿樣中的利尿劑雙氫克尿塞（Hydrochlorothiazide）的初篩。
檢測范圍為：200～2000ng/mL尿。
2. 原理
尿中利尿劑類藥物多以原型形式存在，可以在酸性和堿性條件下直接進行萃取。基本步驟包括：分別在酸性和堿性條件下萃取，合并后吹干，定容，測定。
3. 試劑和材料
3.1 乙酸已酯
3.2 甲醇
3.3 乙腈
3.4 鹽酸乙胺
3.5 酸性固體緩沖劑（pH約3.5）
分析純磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉按重量比99:1混合，pH約3.5。
3.6 堿性固體緩沖劑（pH約9.5）
分析純碳酸氫鈉和碳酸鉀按重量比3:2混合，pH約9.5。
3.7 Acetazolamide, Amiloride, Bendroflumethiazide, Bumetanide, Canrenone, Chlortalidone, Clopamide, Ethacrynic acid, Furosemide, Hydrochlorothiazide, Indapamide, Torasemide, Triamterene, Spironolactone, Xipamide等（美國Sigma公司產品）
3.8 乙酸鉛溶液，50g/L
3.9 帶蓋的普通試管
3.10 1ml小瓶
3.11 鋁蓋（11mm）
3.12 吸液尖，200μL、1mL、5mL
3.13 C18反相液相色譜柱
3.14 往復式振蕩器
3.15 旋渦混合器
3.16 離心機
4. 分析儀器
4.1 STI5000液相色譜儀（二元泵），分析柱為HP18（250mm × 0.5mm × 3μm， 填料 為C18 ，粒度為5μm），二極管陣列檢測器。
4.2 儀器條件
檢測波長為210nm，230nm，275nm，流速為1ml/min，采用磷酸鹽緩沖液（A）（pH = 3）和乙腈（B）進行梯度洗脫，
梯度為： 0 min A 85％ B 15％
10 min A 70％ B 30％
20 min A 65％ B 35％
5. 試樣制備
檢測樣：收集的尿樣
陽性尿：由成年志愿者口服（個別需靜脈注射）利尿劑藥物的成品藥，收集
相應時間段的尿液。
6. 操作步驟
6.1 提取
6.1.1酸性提取
于5mL尿樣中加入2g酸性固體緩沖劑（pH約3.5）和4mL乙酸乙酯，震蕩提取20分鐘后離心分離。有機相中加入2mL乙酸鉛溶液（50g/L），震蕩5秒后離心分離。保留有機相。
6.1.2堿性提取
于5mL尿樣中加入2g堿性固體緩沖劑（pH約9.5）和4mL乙酸乙酯，震蕩提取20分鐘后離心分離。有機相與酸性提取的有機相合并，在50ºC下用氮氣流吹干有機相，殘渣用500μL甲醇溶解。
6.2 儀器分析
取制備好的試樣于液相色譜儀上進樣10μL進行分析。
7. 檢測結果
將尿樣與隨行的標準品的液相色譜圖及紫外光譜圖進行對比，如吻合即可確定該尿樣為可疑，從而完成利尿劑的初篩。
8. 精密度
（略）
9. 參考文獻
興奮劑檢測的有關規定及相關方法。
本篇文章來源于 液相色譜法檢測利尿劑類藥物雙氫克尿塞|科學儀器在線
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